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| Référence | Quantité |
|---|---|
| 90103 | 30 réactions |
Effectuez la mesure des modifications de la cystéine protéique et peptidique (S-nitrosylation, oxydation et ponts disulfures) par spectrométrie de masse quantitative multiplex avec réactifs de marqueur de masse en tandem réactifs à la cystéine Thermo Scientific™ Pierce.
Le kit de marquage de de masse isobare Thermo Scientific iodoTMTsixplex contient des réactifs iodoTMT™ et des matériaux associés pour le marquage irréversible des groupes sulfhydryles. Les réactifs TMT (Tandem Mass Tag™) Iodoacetyl permettent un marquage sélectif des peptides contenant de la cystéine pour l’analyse quantitative des échantillons multiplexés à l’aide de l’analyse LC-MS / MS.
Les réactifs iodoTMT sont des ensembles d’isomères isobares (masse et structure) qui sont activés par l’iodoacétyle pour le marquage covalent et irréversible des groupes sulfhydryles (—SH). Comme l’iodoacétamide, les réactifs iodoTMT réagissent spécifiquement avec des cystéines réduites (Cys) dans les peptides et les protéines et permettent l’analyse quantitative de l’abondance relative des modifications de cystéine, telles que la S-nitrosylation et l’oxydation des liaisons disulfures.
Le réactif de marquage Thermo Scientific iodoTMTzero permet de tester et d’optimiser la préparation des échantillons, le marquage, le fractionnement et la fragmentation de la SM pour l’identification des peptides et la détection des rapporteurs sans utiliser les composés isotopiques les plus coûteux.
Caractéristiques des réactifs iodoTMT :
• Spécifique : ne réagit qu’avec les groupes sulfhydryle (résidus de cystéine réduits et non modifiés)
• Irréversible : les protéines et peptides marqués ne sont pas sensibles aux agents réducteurs
• Flexible : options pour l’analyse quantitative isotopique duplex (MS) ou isobare sixplex (MS / MS)
• Polyvalent : peut être utilisé pour étudier les modifications de la cystéine (par exemple, ponts disulfures, S-nitrosylation)
Pour analyser de manière sélective les peptides marqués à la cystéine, l’échantillon peut être enrichi à l’aide de la résine d’anticorps immobilisée Anti-TMT Thermo Scientific (n° de réf. 90076) et du tampon d’élution TMT (n° de réf. 90104). Cette approche du marquage sélectif du thiol et de l’enrichissement par affinité est semblable aux marqueurs d’affinité à code isotopique (méthode ICAT™), mais permet un enrichissement par affinité avec un marqueur non biologique et une analyse quantitative multiplex plus élevée.
Références générales :
Thompson, A., et al. (2003). Tandem mass tags: a novel quantification strategy for comparative analysis of complex protein mixtures by MS/MS. Anal. Chem. 75:1895-204.
Forrester MT, et al. (2009). Detection of protein S-nitroylsation with the biotin technique. Free Radic Biol Med. 46(2):119-126.
Gygi, S.P., et al. (1999). Quantitative analysis of complex protein mixtures using isotopecoded affinity tags. Nat. Biotech. 17:994-9.
Murray CI, et al. (2012) Identification and quantification of S-nitrosylation by cysteine reactive tandem mass tag switch assay. Mol Cell Proteomics. 11(2): M111,013441.
Yao, C., et al. (2013). Proteomic study of reversible cysteine oxidation in catalase overexpressing mice on a western diet. FASEB J, Avr 2013 ; 27:810,3.