DNase I, sans RNase (fournie avec MnCl2) (1 U/μl)

L’enzyme Thermo Scientific DNase I, exempte de RNase, est une endonucléase qui digère l’ADN simple brin et double brin. Elle hydrolyse les liaisons phosphodiester et produit des monodésoxyribonucléotides et des oligodésoxyribonucléotides avec des groupes de 5’-phosphate et de 3’-OH.

L’activité de l’enzyme dépend strictement du Ca2+ et est activée par les ions Mg2+ ou Mn2+.

En présence de Mg2+, la DNase I clive chaque brin d’ADN double brin indépendamment de manière statistiquement aléatoire. En présence de Mn+, l’enzyme clive les deux brins d’ADN approximativement au même site, produisant des fragments d’ADN avec des extrémités franches ou des extrémités saillantes d’un ou deux nucléotides seulement.

Points forts

• Enzyme recombinante
• Purifiée à partir d’un hôte non animal avec moins de RNases intrinsèques

Applications

• Préparation d’ARN exempt d’ADN
• Enlèvement de l’ADN modèle après transcription in vitro
• Préparation d’ARN exempt d’ADN avant une RT-PCR et une RT-qPCR
• Marquage de l’ADN par traduction de coupure conjointement avec la polymérase I
• Études des interactions ADN-protéine par empreinte de DNase I, exempte de RNase
• Création d’une bibliothèque d’inserts d’ADN à chevauchement aléatoire. Utilisation d’un tampon de réaction contenant du Mn2+

Remarque

La DNase I est sensible à la dénaturation physique. Mélangez délicatement en inversant le tube. Ne mélangez pas au vortex.