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Thermo Scientific Restore Western Blot Stripping Buffer는 nitrocellulose와 PVDF 막(membrane)에서 일차 항체와 이체 항체를 안전하고 효과적으로 제거하므로 화학발광 웨스턴 블롯(Western Blot)을 리프루빙(reprobing)할 수 있습니다.
Restore Western Blot Stripping Buffer의 특징:
• 시간 절약—겔과 블롯을 다시 실행하지 않아도 됨 • 고가의 샘플 절약—동일한 표적 샘플을 사용해 막(membrane) 리프루빙(reprobing) • 효율성—항체를 스트리핑(stripping)하는 데 있어 직접 제조한 버퍼보다 제형이 더 효율적임 • 부드러움—스트리핑(stripping) 중에 표적 항원을 손상시키지 않아 효율적인 리프루빙(reprobing) 가능 • 무취—mercaptan이 없어 매캐한 냄새가 나지 않음 • 경제성—다른 상용 스트리핑(stripping) 버퍼보다 저렴함
제품 세부 정보 겔 전기영동과 중복 면역블롯 분석을 실시하여 새로운 일차 항체 농도를 검사하는 작업은 시간이 오래 걸리고 비용이 많이 듭니다. Western Blot Stripping Buffer는 화학발광 웨스턴 블로팅(Western blotting) 기질을 사용해 검출할 때 이러한 낭비를 없애줍니다. Restore Stripping Buffer는 고정된 항원을 제거하거나 손상시키지 않고 면역블롯에서 일차 항체와 이차 항체를 깔끔하고 효과적으로 제거하므로, 확신을 갖고 블롯을 스트리핑(stripping)하고 리프루빙(reprobing)할 수 있습니다.
horse radish peroxidase용 Thermo Scientific SuperSignal Substrate와 같은 시약을 사용한 화학발광 웨스턴 블롯(Western Blot) 검출은 현재 사용 중인 방법 중 가장 많이 사용되는 민감도 높은 방법입니다. 이 기질은 침전되지 않고 막(membrane) 표면에 영구적으로 결합되기 때문에, 화학발광을 통해 검출된 웨스턴 블롯(Western Blot)을 친화 결합 일차 항체와 이체 항체를 제거하는 시약으로 스트리핑(stripping)할 수 있습니다. 효율성을 높이기 위해 스트리핑(stripping) 버퍼는 결합된 항체를 분리할 만큼 충분히 강하면서도, 전달된 표적 단백질이 nitrocellulose 또는 PVDF 막(membrane)에 손상 없이 남아 있을 만큼 강하지 않아야 합니다. Restore Western Blot Stripping Buffer에는 그러한 여러 특징이 있습니다.
스트리핑(stripping)하고 리프루빙(reprobing)하기 때문에 다양한 표적에서 프루빙하기 위해 여러 겔을 실행함으로써 희귀하거나 고가의 샘플을 폐기하지 않아도 됩니다. 겔 하나의 단일 막을 Restore Western Blot Stripping Buffer로 스트리핑(stripping)하여 일차 항체를 제거할 수 있습니다. 블롯을 스트리핑(stripping)하는 작업은 일차 항체의 친화력에 따라 단 15-30분만이 걸립니다. 스트리핑(stripping) 후 새 일차 항체로 차단하고 리프루빙합니다. 그렇지 않으면, 처음의 나쁜 결과를 얻은 후 조절된 항체 농도로 블롯을 스트리핑(stripping)하고 리프루빙(reprobing)하여 조건을 최적화할 수 있습니다.
어플리케이션 • nitrocellulose 또는 PVDF 블롯을 재사용해 다른 일차 항체로 다른 표적을 검출함 • 블롯을 리프루빙(reprobing)하여 처음에 비효율적이었던 항체 농도를 교정하거나 최적화함
프로토콜 요약 • 블롯을 세척하여 화학발광 기질을 제거합니다. • 37°C(일부 항체는 실온으로도 충분함)에서 5-15분간 Restore Western Blot Stripping Buffer에서 블롯을 배양합니다. • 블롯을 꺼내 세척액(TBS-T 또는 PBS-T)으로 세척합니다. • 항체가 충분히 제거되었는지 검사합니다. • 다음 면역블롯 실험을 실시합니다.
* 한글화 제품번호 : 0021059(NCI1059KR), 용량 : 500 mL
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
사양
검출 방법Chemiluminescence
용도(애플리케이션)Western Blot
형태Liquid
Membrane CompatibilityNitrocellulose, PVDF
제품라인Restore
제품 유형Western Blot Stripping Buffer
수량500 mL
Unit SizeEach
구성 및 보관
Storage: Upon receipt store at room temperature or 4°C. Product shipped at ambient temperature.
자주 묻는 질문(FAQ)
How many times can I strip my blot using Restore or Restore Plus Western Blot Stripping Buffers ?
The stability of the attached (transferred and bound) protein will determine the number of times the membrane can be successfully re-probed after stripping. The protein may withstand stripping as many as four times or as few as one time.
Can I strip membranes with Restore or Restore Plus Western Blot Stripping Buffer and reprobe for subsequent detection with fluorescent probes?
No. Although the fluorescent antibodies, like other antibodies, can be stripped with Restore Buffers, stripped membranes typically produce unacceptable background for subsequent fluorescent detection methods. We recommend Restore Fluorescent Western Blot Stripping Buffer, Cat. No. 62299 (20 mL) and Cat. No. 62300 (100 mL).
Note: Restore Fluorescent Western Blot Stripping Buffer is for use with low-fluorescence PVDF membrane (Cat. No. 22860) only.
Will Restore and Restore Plus Western Blot Stripping Buffers remove biotin-bound avidin, streptavidin or NeutrAvidin Protein conjugates?
No. Restore and Restore Plus Buffers are not stringent enough to break the avidin-biotin interaction. A buffer capable of breaking this interaction would likely also damage the target protein, making it undetectable. However it may be possible to strip the complexed biotinylated primary antibody and streptavidin-HRP secondary antibody from the target protein on the membrane. Please also see Tech Tip: Strip and Reprobe Western Blots (https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/BID/Technical-Notes/strip-reprobe-western-blots-tech-tip.pdf).
Will the Restore and Restore Plus Western Blot Stripping Buffers remove precipitating substrates?
No. The antibodies are removed but the substrate leaves a permanent precipitate on the membrane that cannot be removed. Restore and Restore Plus Buffers are designed for procedures using chemiluminescent substrates. Please note that this is not compatible with fluorescence supstrates as it will result in increased background. For fluorescent substrates please use our Restore Fluorescent Western Blot Stripping Buffer. Please also see Tech Tip: Strip and Reprobe Western Blots (https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/BID/Technical-Notes/strip-reprobe-western-blots-tech-tip.pdf).