The BigDye XTerminator™ Purification Kit는 DNA sequencing reaction에 사용되는 빠르고 간편한 정제 방법으로 unincorporated BigDye™ terminator와 염을 제거합니다. 더 이상 dye blob이 필요하지 않습니다! 40분 내에 Cleanup이 완료되어 작업 시간이 10분 미만입니다.

• liquid transfer 불필요– single plate 사용.
• 완전한 dye blob 제거
• 분석 전 샘플 안정화
• sequencing workflow 개선
• 수동 또는 자동 프로토콜 실시
• 신속하고 믿을 수 있고 재현성이 높은 결과 확보가 가능함.

간단한 정제 과정s
ethanol precipitation같은 기존 정제 방법은 decanting 및 centrifuging 단계와 여러 추가 시약이 필요했습니다. BigDye XTerminator™ Purification Kit는 순서대로 추가하거나 미리 혼합해 놓을 수 있는 단 두 가지 시약만 첨가합니다.

• XTerminator™ 용액– post-sequencing reaction에서 unincorporated dye terminator와 free salt 제거
• SAM™ Solution – XTerminator™ 용액의 성능 강화, 정제 후 반응 안정화.

프로토콜이 매우 간편합니다(그림 1 참조).
1. BigDye™ terminator로 cycle sequencing 실시.
2. cycle sequencing 후 reaction plate를 잠시 원심분리하고 SAM™ Solution 적정량을 각 plate well에 피펫으로 분주.
3. XTerminator™ Solution 적정량을 각 well에 피펫으로 분주.
4. XTerminator™ Solution bulk container를 잠시 교반.
5. wide-bore pipette tip (권장 wide-bore tip)을 사용해 liquid 적정량을 각 plate well에 피펫으로 분주
6. heat seal 또는 Clear Adhesive Film (P⁄N 4306311)를 사용해 plate 밀봉. 30분간 교반(권장: 96-well microplate vortexers, 384-well microplage vortexers). 그리고 이 reaction plate를 잠시 원심분리.
7. Applied Biosystems™ DNA analyzer에 reaction plate 삽입. run module과 run plate 선택.

탁월한 Long Fragment Recovery
BigDye XTerminator™ Purification Kit을 사용하면 sequence length를 포기하지 않아도 됩니다. 그림 2에 캐나다 Saskatoon에 소재한 DNA Technology Unit, Plant Biotechnology Institute (NRC-PBI)의 데이터가 나와 있습니다. Q20 base read=1044 bp.

향상된 Short Fragment Recovery
BigDye XTerminator™ Purification Kit를 사용하여 고품질 데이터를 얻을 수 있습니다. 그림 3은 캐나다 Saskatoon에 소재한 DNA Technology Unit, Plant Biotechnology Institute (NRC-PBI)에서 실시한 BigDye XTerminator™ Purification Kit와 ethanol precipitation-based 정제 의 비교입니다. BigDye XTerminator™ Purification Kit이 우수한 short fragment recovery 결과를 나타냅니다. Ethanol 정제는 sequence data가 dye blob으로 손상되었습니다.

안정성 증가
Sealed reaction plate는 실온에서 48시간 또는 4°C에서 10일간 안정성이 유지됩니다. 정전, 컴퓨터 고장 등이 발생한 경우 실험을 반복할 필요없이 동일한 샘플로 re-run할 수 있습니다. 이로 reaction plate를 CE 장치에 로딩 시 융통성이 커집니다.

Run Module 사용가능
Applied Biosystem은 BigDye XTerminator™ Purification Kit 및 Data Collection Software에 사용할 수 있는 다운로드가 가능한 run module을 제공합니다. 이런 module은 3100, 3100–Avant (Data Collection v2.0 이상), 3130⁄3130xl, 3730⁄3730xl Analyzer에 맞게 만들어져있습니다. 이 BigDye XTerminator™ Purification Kit용 software module은 Windows™ 2000, Windows™ XP 운영 시스템에서 사용할 수 있으며 본사 소프트웨어 다운로드 페이지

유전자 분석을 위한 Applied Biosystems 통합 시스템 ›

에서 다운받을 수 있습니다. 이 제품은 연구용으로만 사용가능합니다. 진단 절차에 사용할 수 없습니다.