BigDye XTerminator™ Purification Kit
BigDye XTerminator™ Purification Kit
Applied Biosystems™

BigDye XTerminator™ Purification Kit

The BigDye XTerminator™ Purification Kit는 DNA sequencing reaction에 사용되는 빠르고 간편한 정제 방법으로 unincorporated BigDye™ terminator와 염을 제거합니다. 더 이상자세히 알아보기
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카탈로그 번호수량
4376486100 Preps
43764871000 Preps
43764842500 Preps
437648540,000 Preps
카탈로그 번호 4376486
제품 가격(KRW)
494,000
Each
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수량:
100 Preps
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The BigDye XTerminator™ Purification Kit는 DNA sequencing reaction에 사용되는 빠르고 간편한 정제 방법으로 unincorporated BigDye™ terminator와 염을 제거합니다. 더 이상 dye blob이 필요하지 않습니다! 40분 내에 Cleanup이 완료되어 작업 시간이 10분 미만입니다.

• liquid transfer 불필요– single plate 사용.
• 완전한 dye blob 제거
• 분석 전 샘플 안정화
• sequencing workflow 개선
• 수동 또는 자동 프로토콜 실시
• 신속하고 믿을 수 있고 재현성이 높은 결과 확보가 가능함.

간단한 정제 과정s
ethanol precipitation같은 기존 정제 방법은 decanting 및 centrifuging 단계와 여러 추가 시약이 필요했습니다. BigDye XTerminator™ Purification Kit는 순서대로 추가하거나 미리 혼합해 놓을 수 있는 단 두 가지 시약만 첨가합니다.

• XTerminator™ 용액– post-sequencing reaction에서 unincorporated dye terminator와 free salt 제거
• SAM™ Solution – XTerminator™ 용액의 성능 강화, 정제 후 반응 안정화.

프로토콜이 매우 간편합니다(그림 1 참조).
1. BigDye™ terminator로 cycle sequencing 실시.
2. cycle sequencing 후 reaction plate를 잠시 원심분리하고 SAM™ Solution 적정량을 각 plate well에 피펫으로 분주.
3. XTerminator™ Solution 적정량을 각 well에 피펫으로 분주.
4. XTerminator™ Solution bulk container를 잠시 교반.
5. wide-bore pipette tip (권장 wide-bore tip)을 사용해 liquid 적정량을 각 plate well에 피펫으로 분주
6. heat seal 또는 Clear Adhesive Film (P⁄N 4306311)를 사용해 plate 밀봉. 30분간 교반(권장: 96-well microplate vortexers, 384-well microplage vortexers). 그리고 이 reaction plate를 잠시 원심분리.
7. Applied Biosystems™ DNA analyzer에 reaction plate 삽입. run module과 run plate 선택.

탁월한 Long Fragment Recovery
BigDye XTerminator™ Purification Kit을 사용하면 sequence length를 포기하지 않아도 됩니다. 그림 2에 캐나다 Saskatoon에 소재한 DNA Technology Unit, Plant Biotechnology Institute (NRC-PBI)의 데이터가 나와 있습니다. Q20 base read=1044 bp.

향상된 Short Fragment Recovery
BigDye XTerminator™ Purification Kit를 사용하여 고품질 데이터를 얻을 수 있습니다. 그림 3은 캐나다 Saskatoon에 소재한 DNA Technology Unit, Plant Biotechnology Institute (NRC-PBI)에서 실시한 BigDye XTerminator™ Purification Kit와 ethanol precipitation-based 정제 의 비교입니다. BigDye XTerminator™ Purification Kit이 우수한 short fragment recovery 결과를 나타냅니다. Ethanol 정제는 sequence data가 dye blob으로 손상되었습니다.

안정성 증가
Sealed reaction plate는 실온에서 48시간 또는 4°C에서 10일간 안정성이 유지됩니다. 정전, 컴퓨터 고장 등이 발생한 경우 실험을 반복할 필요없이 동일한 샘플로 re-run할 수 있습니다. 이로 reaction plate를 CE 장치에 로딩 시 융통성이 커집니다.

Run Module 사용가능
Applied Biosystem은 BigDye XTerminator™ Purification Kit 및 Data Collection Software에 사용할 수 있는 다운로드가 가능한 run module을 제공합니다. 이런 module은 3100, 3100–Avant (Data Collection v2.0 이상), 3130⁄3130xl, 3730⁄3730xl Analyzer에 맞게 만들어져있습니다. 이 BigDye XTerminator™ Purification Kit용 software module은 Windows™ 2000, Windows™ XP 운영 시스템에서 사용할 수 있으며 본사 소프트웨어 다운로드 페이지

유전자 분석을 위한 Applied Biosystems 통합 시스템 ›

에서 다운받을 수 있습니다. 이 제품은 연구용으로만 사용가능합니다. 진단 절차에 사용할 수 없습니다.
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
사양
최종 제품 유형DNA
용도(애플리케이션)Sequencing
포함2 Bottles
반응 수100
제품라인BigDye XTerminator, BigDye
제품 유형Purification Kit
수량100 Preps
샘플 종류Sequencing Products
배송 조건Wet Ice
시작 물질 양10 μl
타겟Sequencing Reactions
테스트 시간40 min
형식Kit
Unit SizeEach
구성 및 보관
2 mL XTerminator™ Solution (store at 4°C), 9 mL SAM™ Solution (store at room temperature or 4°C)

자주 묻는 질문(FAQ)

Can I store samples in BigDye Xterminator solution? If so, what is the optimal temperature, and for how long can I store it?

Yes, after cleaning the sequencing product using the BigDye XTerminator Purification Kit, the end product can be stored up to 10 days at either 4°C or –20°C.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Capillary Electrophoresis Applications Support Center.

What is a dye blob?

After the cycle sequencing reaction is complete, unincorporated ddNTPs can form complexes that migrate more slowly than individual ddNTPs would. These complexes can interfere with electrokinetic injection, electrophoretic separation, and data analysis. In the electropherogram these can be observed as a region containing multicolored peaks of varying sizes or blobs, depending on the efficiency of the cleanup. In BigDyeTerminator v3.1 reactions, these blobs may appear around 70–80 bp and, in severe cases, 110–120 bp. For BigDye Terminator v1.1, the blobs will either migrate ahead of the data collection time (so they will not be visible) or they may be visible at the very beginning of the run.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Capillary Electrophoresis Applications Support Center.

What are the different ways to clean up my sequencing reactions?

While there are many kits and methods available to clean up the extension products from a sequencing reaction, the ones that Thermo Fisher Scientific has formally tested and recommends are:

•BigDye XTerminator Purification Kit
•Ethanol precipitation
•Spin column/plate purification (e.g. Centri-Sep columns, DTR Kits from Edge Biosystems)

A list of alternative methods for purification is available in the DNA Sequencing by Capillary Electrophoresis: Applied Biosystems Chemistry Guide: Second Edition (Cat. No. 4305080, Rev. C, page 119). The guide can be found by searching the Thermo Fisher Scientific website with the Cat. No. 4305080.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Capillary Electrophoresis Applications Support Center.

Does the BigDye XTerminator (including SAM Solution) contain any aerosols?

The BigDye Xterminator Solution and SAM Solution do not contain aerosols.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Nucleic Acid Purification and Analysis Support Center.

What kit do you recommend for cleanup of the cycle sequencing reaction?

For the purification of the sequencing reaction, we recommend the BigDye Xterminator Purification Kit. For reference, the following is the link to the BigDye Xterminator Purification Kit User Guide.

Additionally, our Sanger Sequencing Guide has additional recommendations starting on page 68 for purifying the sequencing reaction.

View all BigDye XTerminator™ Purification Kit, 100 Preps FAQs