Exonuclease VII

Exonuclease VII는 5'→3' 및 3'→5' 엑소뉴클레아제 활성을 가지면서 엄격하게 단일 가닥에 작용하는 효소로서 단일 가닥 특이성을 가진 양방향 엑소뉴클레아제입니다. Exonuclease VII는 EDTA가 있을 때 완전 활성화가 되기 때문에 명백한 2가 양이온 요건이 없습니다. 초기 반응 산물은 산 불용성 올리고뉴클레오티드인데 계속 가수 분해되어 산 가용성 형태로 변합니다. 제한된 분해 산물은 분자량이 작은 올리고머(이량체 ∼ 도데카머(dodecamer))입니다.

특성:
분자량: xseA 소단위 = 51.8kDa; xseB 소단위 = 8.8kDa
최적 온도: 37 °C
최적 pH: 8.0
비활성: 95 °C에서 10분간.

순도:
SDS-PAGE에 의해 결정된 95%보다 높은 순도. 엔도뉴클레아제, 이중 가닥 엑소뉴클레아제 및 리보핵산분해효소 오염에 대한 테스트 완료.

저장 완충액:
50mM Tris-HCl(pH 8.0), 200mM NaCl, 0.5mM EDTA, 10mM DTT, 50% 글리세롤.

분석 조건:
반응 혼합물(50μL)에는 50mM Tris-HCl(pH 7.9), 50mM 인산칼륨(pH 7.6), 8.3mM EDTA, 10mM 2-메르캅토에탄올, 비변성 DNA 및 효소가 포함됩니다.

단위 정의:
한 단위는 표준 분석 조건일 때 37°C에서 30분간 1nmol의 뉴클레오티드를 산-가용성 뉴클레오티드로 전환하는 것을 촉매하는 데 필요한 효소의 양입니다.

농도:
10단위/μL

소스:
Exonuclease VII의 대형(xseA) 및 소형(xseB) 소단위 모두를 인코딩하는 과다 생산 클론을 포함하는 E. coli 균주

프로토콜: 일반적인 반응 조건(50μL)
70mM Tris-HCI, pH 8.0
8mM EDTA
10mM 2-메르캅토에탄올
1μg DNA
50μg/mL
0.2 단위 Exonuclease VII

37°C에서 30분간 배양합니다. 95°C에서 10분간 가열하면 효소가 비활성화됩니다. 참고로 Exonuclease VII은 EDTA에 의해 억제되지 않습니다.

참고: Exonuclease VII과 함께 사용되는 일반적인 희석 완충액은 50mM Tris, pH 7.9, 1mM DTT 및 0.5mg/mL 아세틸화 BSA입니다.

애플리케이션:
  1. 게놈 DNA에서 인트론의 위치 매핑
  2. 폴리 (dA-T) 꼬리를 가진 삽입체에서 벡터 DNA 제거
  3. 여분의 PCR 프라이머 제거
  4. 제한 엔도뉴클레아제에 의해 생성된 단일 가닥 돌출부 제거