Poly(A) Polymerase, Yeast

폴리(A) 중합효소는 RNA의 3' 말단에 대한 아데노신 잔류물의 추가를 촉진합니다. 이 효소는 클로닝의 첫 번째 단계에서 폴리(A) 꼬리를 RNA에 추가하는 데 사용할 수 있습니다. 이 반응에는 Mn²⁺ 또는 Mg²⁺, 기질로는 ATP 및 프라이머로는 RNA 함유 3' 수산기 말단이 필요합니다. ATP 대신 코르디세핀-5'-3인산염(3'-dATP)으로 대체하면 RNA 말단에 단일 3'-dA 잔류물이 추가되는데 이는 3' 말단에 RNA를 라벨링하기 위해 유용한 기법입니다.

비교 연구에서 효모균 폴리(A) 중합효소는 RNA 올리고뉴클레오티드 라벨링 및 폴리(A) 꼬리 붙이기의 경우 E. coli 폴리(A) 중합효소보다 더 효율적으로 작용합니다. 효모균 효소의 경우 더 짧은 배양 시간이 필요하며 긴 기질과 짧은 기질 모두 똑같이 잘 라벨링하는 것으로 나타났습니다. 폴리(A) 중합효소는 긴 RNA 분자의 3' 말단 라벨링에서 T4 RNA Ligase보다 더 권장됩니다.

*참고: 다양한 변형된 뉴클레어티드는 또한 효모균 폴리(A) 중합효소를 사용하여 RNA의 3' 말단을 라벨링하는 데도 사용할 수 있습니다.

순도:
리보핵산분해효소 무첨가

저장 완충액:
20mM Tris-HCl(pH 8.0), 50mM KCl, 0.5mM DTT, 50% 글리세롤.

분석 조건:
2 5mM Tris-HCl(pH 7.0), 40mM KCl, 0.5mM MnCl₂, 0.05mM EDTA, 0.5mM DTT, 0.2mg/mL BSA, 10% 글리세롤, 3.3μM 방사선표지된 ATP, 0.5mM ATP, 6.5μg 폴리(A)(∼100 염기), 폴리(A) 중합효소. 37°C에서 10분간 배양 후 산 불용성 방사능이 측정됩니다.

단위 정의:
한 단위는 37°C에서 (riboA)15에 결합된 15pmol/min AMP와 동일합니다.

농도:
600단위/μL

기능 테스트:
코르디세핀-5'-3인산염을 사용한 리보뉴클레오티드의 3‘-말단 라벨링.

기능 테스트가 완료된 5X 폴리(A) 중합효소 반응 완충액(1mL 포함, PN 74226):
100mM Tris-HCl, pH 7.0, 3.0mM MnCl₂, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 500μg/mL 아세틸화 BSA, 50% 글리세롤.

애플리케이션:
  1.RNA에 폴리(A) 꼬리의 추가.
  2.RNA의 3' 말단 라벨링.

소스:
효모균 폴리(A) 중합효소의 과다 생산 클론을 포함하는 E. coli 균주