Poly(A) Tail-Length Assay Kit

효율 향상을 위해 새롭게 재구성된 키트: 76455 1 KT Poly(A) Tail-Length Assay Kit는 76450 1 KT

의 직접 대체품• 일반 실험실 장비를 사용하여 3시간 내에 다수의 RNA에서 폴리(A) 꼬리 측정
• 다른 분석(노던 블로팅 등)과 비교하여 폴리(A) 꼬리 길이를 정확하게 분석
• 하나의 키트에 5 G/I 꼬리 붙이기, 20 RT 및 80 PCR 반응을 위해 최적화된 시약 포함

제품 설명:
진핵 세포 mRNA의 아데닐중합체형성은 안정성, 전사 증가, 핵 방출, miRNA 매개 유전자 조절 등을 포함하는 RNA 대사에서 매우 중요한 역할을 합니다. Poly(A) Tail-Length Assay Kit를 통해 3시간 안에 다수의 mRNA에서 폴리(A) 꼬리를 신속하게 측정할 수 있습니다. 이 키트는 RNA의 3' 말단을 보존하면서 폴리(A) 꼬리 길이를 정확하게 측정해 주는 새로운 G/I 확장 기법을 활용합니다. 또한 모든 반응 요소가 최적화되어 고품질의 데이터를 신속하게 얻을 수 있습니다.

제품 설명:
Poly(A) Tail-Length Assay Kit는 폴리(A) 꼬리 길이 측정에 필요한 4가지의 핵심 단계를 사용합니다(그림 1).

1단계에서는 폴리(A) 중합효소가 제한된 수의 구아노신과 이노신 잔류물을 폴리(A) 함유 RNA의 3’ 말단에 추가합니다.

2단계에서는 꼬리가 달린 RNA가 새롭게 추가된 G/I 꼬리를 프라이밍 부위로 사용하여 역전사를 통해 DNA로 변환됩니다.

3단계에서는 2개의 프라이머 세트를 사용하여 PCR 증폭 산물이 생성됩니다. 아데닐중합체형성 부위(예: 3’-UTR)의 업스트림 프라이머로 설계된 유전자별 순방향 및 역방향 프라이머 세트가 관심 유전자의 대조물질로서 생성됩니다. 두 번째 프라이머 세트는 키트와 함께 제공된 유전자별 순방향 프라이머와 범용 역방향 프라이머를 사용하여 관심 유전자의 폴리(A) 꼬리를 포함하는 산물을 생성합니다.

최종적으로 4단계에서 PCR 산물은 아가로스 또는 폴리아크릴아마이드 젤에서 분리됩니다(그림 2).

키트 구성 요소:
키트에는 5 G/I 꼬리 붙이기, 20 역전사 및 80 PCR 반응을 위해 필요한 모든 시약이 포함되어 있습니다.

선택된 참고 문헌:
Parker, R. and Song, H. (2004) Nat Struct Mol Biol. 11 121-127.
Brodersen, D.E. et al.  (2008) Biochim Biophys Acta. 1779, 532-537.
Wu, L., Fan J. and Belasco, J.G. (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 4034-4039.
Izaurralde, E. et al. (2009) RNA 15, 21-32.
Martin, G. and Keller, W. (1998) RNA 4, 226-230.
Gauss-Müller, V. et al. (2001) Nucleic Acids Res. 29 E57-7