Apo-BrdU Apoptosis Detection Kit

APO-BRDU™ 키트는 유세포분석으로 자가사멸 세포를 검출하기 위해 DNA 파손 및 총 세포 DNA 라벨링을 위한 2-색상 염색 방법입니다. 이 키트에는 시약 성능 평가를 위한 양성/음성 대조 세포를 비롯하여 세포자멸사를 측정하는데 필요한 설명 및 시약, 검사의 개별 단계 진행을 위한 세척, 반응 및 린스용 완충액, TdT(말단 디옥시뉴클레오티딜 전이효소), Br-dUTP(브로모디옥시우리딘 3인산염), DNA 파손 라벨링을 위한 플루오레세인 라벨링 항BrdU 항체, 전체 DNA의 대조 염색을 위한 프로피듐 요오드화물/RNase A 용액 등이 들어 있습니다.

가장 쉽게 측정할 수 있는 자가사멸 세포의 특징 중 하나는 세포 뉴클레아제에 의한 유전체 DNA의 파괴입니다. 이 DNA 절편은 자가사멸 세포에서 추출할 수 있으며 아가로스 젤 전기영동으로 DNA를 분석하면 DNA 사다리형 밴드가 나타납니다. 대부분 온전한 형태로 남아 있는 비-자가사멸 세포의 DNA는 전기영동 과정에서 아가로스 젤 위에 이 사다리형 밴드가 나타나지 않습니다. 자가사멸 세포에 나타나는 DNA 절편의 대다수에서 DNA 내에 많은 수의 3'-수산기 말단이 나타납니다. 이러한 속성을 이용하여 Br-dUTP(브롬화 디옥시우리딘 3인산염 뉴클레오티드)를 가진 3'-수산기 말단을 라벨링하여 자가사멸 세포를 식별할 수 있습니다. TdT(말단 디옥시뉴클레오티딜 전이효소)는 평활, 함몰 또는 돌출 말단을 가진 이중 또는 단일 가닥 DNA의 3'-수산기 말단에 템플릿 독립적으로 디옥시리보뉴클레오시드 3인산염의 추가를 촉진합니다. 이러한 부위의 상당수가 자가사멸 세포에서 발견되며 APO-BRDU™ 키트에서 이용하는 방법은 이를 기반으로 합니다. 최근 연구에서 플루오레세인, 비오틴 또는 디곡시게닌과 같은 큰 리간드에 결합되는 디옥시뉴클레오티드 3인산염보다 Br-dUTP가 자가사멸 세포의 게놈에 더 쉽게 결합된다는 사실이 확인되었습니다. Br-dUTP 부위가 플루오레세인으로 라벨링된 항BrdU 단클론항체에 의해 식별되는 경우 결합도가 높을수록 유세포분석 신호가 더 밝게 나타납니다. 비-자가사멸 세포는 노출된 3'-수산기 DNA 말단이 결핍되어 많은 양의 Br-dUTP와 결합하지 않습니다.

70%(v/v) 에탄올에 약 1x10⁶의 세포가 들어 있는 5mL 양성 및 5mL 음성 대조 세포 부유액을 비롯한 전체 60 세포 부유액 처리를 위한 충분한 시약이 제공됩니다.