Ambion® RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit는 포르말린 또는 파라포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직에서 총 핵산 추출에 사용합니다. 최대 20 μm section 4개 또는 unsectioned core sample 최대 35mg에서 40회 정제하기 충분한 시약이 들어있습니다. • FFPE 조직에서 microRNA 등 총 핵산 분리에 최적화• 하룻밤이 걸리는 Proteinase K digestion 불필요—아침에 deparaffinize하면 오후에 qRT-PCR를 수행할 수 있습니다. • 동일한 샘플원의 비고정 샘플과 비교해 일반적 수율 50% 이상• 회수된 핵산은 real-time RT-PCR, PCR, mutation screening, microarray analyse에 적합합니다. 저장된 조직 샘플에는 질병 상태 등의 중요한 정보가 들어있지만 기존에는 분자 분석에 적합한 품질로 조직에서 핵산을 분리하기가 어려웠습니다. 표준 보존 기법에 조직 구조를 유지하고 putrefecation을 방지하며 핵산을 포확하고 단백질 간 및 단백질-핵산 간 crosslink를 통해 이들을 조절하는 포르말린을 도입하였습니다. RNA (및 일부 DNA)는 대개 너무 조각나거나 화학적으로 조작되어 많은 분자 분석 기법에 사용할 수 없습니다. FFPE 조직에서 RNA fragmentation는 복구 불가능이나 RecoverAll™ Kit의 protease digestion 조건은 microRNA를 비롯해 모든 크기의 포획된 RNA fragment를 최대량을 상대적으로 짧은 시간 내에 방출할 수 있게 하였습니다(그림 참조). RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit 절차에서는 연구자의 작업 시간이 약 45분이며 RNA 분리를 하루 내에 쉽게 할 수 있습니다. FFPE 샘플은 xylene 및 ethanol 세척을 통해 deparaffinize합니다. 그 다음 RNA 또는 DNA 회수에 맞는 배양 시간 동안 확실한 protease digestion을 실시합니다. 핵산은 신속한 유리 필터법으로 정제하여 물이나 제공된 저염 버퍼로 용출합니다. 모든 FFPE 조직에서 처럼 샘플 고정과 보관 시 핵산이 분열되거나 변형될 수 있습니다. 그렇기 때문에 qRT-PCR보다 원래 상태의 RNA가 필요한 microarray analysis 등 다음 단계 분석에는 최선의 결과를 얻기 위해 modification이 필요할 수 있습니다. DNA는 RNA 만큼 잘 분열되진 않지만 포르말린에 반응성이 높은 것으로 나타나 DNA를 많은 양 방출하는 경우 protease digestion 시간을 연장해야 합니다(약 2일).