pENTR™/SD/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli

pENTR™⁄SD⁄D-TOPO™ Cloning Kit는 매우 효율적인 5분 cloning 전략("TOPO™ Cloning")을 이용해 blunt-end PCR 산물을 Gateway™ System or the MultiSite Gateway™ System에 들어가는 vector로 directional cloning합니다. Blunt-end PCR 산물이 pENTR™⁄SD⁄D-TOPO™ entry vector에 직접적으로 복제하며(효율 90% 이상) 원핵생물에서 발현하는 upstream Shine-Dalgarno sequence를 함유하고 있습니다. 이 kit는 PCR 증폭 유전자를 cloning하고 선택하는데 필요한 모든 것을 제공합니다.

• Gateway™ 시스템 준비 — 여러 vector system 간 cloned gene을 신속하게 운반
• 신속, 용이 — 단 5분 내에 3단계로 PCR에서 Gateway™ Entry clone으로
• 효율적 — 맞는 방향으로 올바르게 삽입하여 90% 이상 clone
• 성능 입증 — 십여년 간 믿을 수 있는 성능

간편한 Gateway™ System 접근
Gateway™ System에 들어가려면 대상 유전자를 PCR 증폭하고 제공된 topoisomerase charged pENTR™ ⁄SD⁄D-TOPO™ vector에 곧바로 추가한 후 5분 간 배양하고 제공된 해당 E. coli 세포에 넣으세요. 이렇게 만들어진 Gateway™ Entry clone 함유 attL을 이용해 선택한 Gateway™ Destination vector로 효율적인 재조합을 즉시 수행할 수 있습니다.

최적화된 pENTR™ ⁄SD⁄D-TOPO™ Vector
pENTR™ ⁄SD⁄D-TOPO™ vector (그림 1)에는 원핵생물 Gateway™ destination vector와 재조합 후 native protein에 최적화된 T7 gene 10 translational enhancer와 ribosome binding site (RBS)가 들어있습니다. 다른 destination vector와 재조합하여 다른 숙주 시스템에서도 이 발현 벡터를 이용할 수 있습니다. 이 벡터에는 PCR 산물 삽입부에 인접한 M13 및 T7 primer sequencing site와 attL recombination site가 있습니다. 이로 clone sequence를 쉽게 검증하고 선택한 attR containing Gateway™ destination vector에 재조합할 수 있습니다. Kanamycin resistance gene와 pUC origin이 E. coli 선택과 high-copy propagation에 이용됩니다.

단순화된 Directional Cloning
Directional TOPO™ cloning 기법을 사용하면 PCR 세척, vector preparation이나 다른 시간이 많이 걸리는 DNA manipulation 단계가 필요없습니다. PCR 반응을 곧바로 제공된 topoisomerase charged vector에 추가하여 5분 간 배양시킨 후 transform하면 최대 90%의 directional clone을 얻을 수 있습니다. 이 vector에 있는 four base overhang이 PCR 반응에 사용되는 forward primer에 설계된 four base sequence와 짝을 이루어 topoisomerase ligation 반응에 방향성을 제공합니다(Figure 2).

Gateway™ Recombination Cloning 기술력
Gateway™ recombination cloning 기술은 mediated cloning의 한계를 피해 1시간 내에 99% 효율성과 가역성을 가진 Gateway™ recombination 반응에서 실제 모든 expression system에 접근할 수 있습니다. restriction enzymes, ligase, subcloning 단계, 수많은 colony screening 또는 re-sequencing 없이 다른 vector 간 동일한 DNA sequence를 이동시키는 능력은 시간과 돈, 노력을 절감시킵니다.

선도적인 Cloning 기술
cloning에서 TOPO™ cloning 기술과 Gateway™ recombination cloning 기술은 십여 년 간 수 천 만의 과학자들이 이용하고 있는 믿을 수 있는 기술입니다. 빠르고 사용이 간편하며 효율적인 TOPO™ cloning과 Gateway™ recombination으로 cloning과 다양한 Gateway™ expression vector 조합 간 gene transfer를 빠르게 할 수 있습니다.

Kit 옵션
pENTR™⁄SD⁄D-TOPO™ Cloning Kit는 표준 cloning용 TOP10 competent cell이나 빠른 성장율을 위한 Mach1™-T1R competent cell로 구매 가능합니다.

이 제품은 연구용으로만 사용가능 합니다. 치료 또는 진단 목적으로 동물이나 인간에 사용할 수 없습니다.