TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli
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TOPO&trade; TA Cloning&trade; Kit for Sequencing, with One Shot&trade; TOP10 Chemically Competent <i>E. coli</i>
인용 및 참조 문헌 (5)
Invitrogen™

TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli

TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencing은 염기서열분석을 위해 Taq polymerase 증폭 PCR 산물을 plasmid 벡터로 직접 삽입하는 효율성 높은 5분자세히 알아보기
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카탈로그 번호수량
K45754050 Reactions
K4575J1010 Reactions
K45750125 Reactions
K4575J10SC
K4575-J10SC으로도 사용됨
10 Reactions
카탈로그 번호 K457540
제품 가격(KRW)
1,605,000
온라인 행사
Ends: 31-Dec-2025
1,888,000
할인액 283,000 (15%)
Each
카트에 추가하기
수량:
50 Reactions
제품 가격(KRW)
1,605,000
온라인 행사
Ends: 31-Dec-2025
1,888,000
할인액 283,000 (15%)
Each
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TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencing은 염기서열분석을 위해 Taq polymerase 증폭 PCR 산물을 plasmid 벡터로 직접 삽입하는 효율성 높은 5분 원스텝 클로닝 전략('TOPO™ Cloning')을 제공합니다. 각 키트는 각 반응에서 회수되는 삽입 염기서열을 늘리고 벡터 염기서열을 줄이도록 특별히 설계된 염기서열부석 primer 부위가 있는 pCR™4-TOPO™ TA 벡터를 사용합니다. 이들 키트에는 선택한 PCR 분절을 가진 재조합 벡터 클로닝과 선택에 필요한 모든 것이 들어있습니다.

  • 더 많은 염기서열 획득—표준 염기서열분석 primer를 사용할 때보다 삽입 염기서열이 많고 벡터 염기서열이 적습니다.
  • 빠르고 쉬움—PCR에서 클로닝까지 단 3단계로 이루어지며 작업 시간이 5분 이내입니다.
  • 효율적—올바른 삽입으로 최대 95%의 클론을 얻습니다
  • 입증된 성능—십여년 동안 4000건 이상 인용된 믿을 수 있는 성능을 제공합니다.

TOPO™ TA Cloning™ Kits 염기서열분석 키트 개요
  • 벡터: pCR™4-TOPO™ TA Vector
    — 염기서열분석 결과 개선을 위해 최적화된 클로닝 벡터

  • 클로닝 방법: TOPO™ TA 클로닝
    — Topoisomerase I 기반, 5분 이내에 3´A overhangs (Taq-증폭)이 있는 PCR 산물을 벡터에 결합

  • COMPETENT CELLS: 다양한 옵션
    — 일반적인 고효율 박테리오파지 T1-내성 세포 또는 fast-growing competent 세포로 키트 선택

pCR™4-TOPO™ TA Vector—염기서열분석에 최적화
pCR™4-TOPO™ TA 벡터에서 여러 다중 클로닝 부위를 제거하여 염기서열분석 primer 부위와 삽입 부위 간 거리를 33 bp까지 줄였습니다. 이는 염기서열분석 반응으로 벡터 서열 감소와 삽입 염기서열이 많아짐을 의미합니다. pCR™4-TOPO™ TA 벡터는 다음과 같은 4가지 공통 염기서열분석 primer 부위를 가지고 있습니다: M13 forward, M13 reverse, T7, T3. 키트마다 각 aliquot가 들어있습니다.

pCR™4-TOPO™ TA Clone 선택 및 조작
pCR™4-TOPO™ TA 벡터에는 ampicillin 및 kanamycin 내성 표지자와 LacZα-ccdB 유전자 융합이 들어있어 양성 선택 및 청색⁄백색 스크리닝이 가능합니다. 이 벡터는 다중 클로닝 부위가 최소화되어 있지만 여전히 클로닝된 PCR 산물의 간편한 절단을 위한 flanking EcoRI 부위와 염기서열분석 전 nested 결실 세대에 대한 고유한 Sse8387I 부위를 가지고 있습니다. in vitro transcription을 위해 T7 및 T3 promoter도 존재합니다.

편한 TOPO™-기반 클로닝
TOPO™ 클로닝 기술을 사용하여 특정 염기서열을 포함한 PCR primer, PCR 후 절차, 벡터 준비 또는 기타 시간이 허비되는 DNA 조작 단계가 필요하지 않습니다. PCR 반응을 곧바로 제공된 topoisomerase charged vector에 추가하여 5분 간 배양시킨 후 E. coli competent cells로 transform합니다.

효율적인 클로닝
원하는 insert를 가진 클론의 최대 95%까지 스크리닝하는 클론을 줄여 시간과 비용을 절약할 수 있습니다. 이 키트에 사용되는 pCR™2.1-TOPO™ TA 벡터는 3´A overhangs을 가진 Taq 증폭 PCR 산물의 효과적인 결합을 위해 3´T overhangs와 함께 제공됩니다.

클로닝 표준
클로닝의 경우, TOPO™ 클로닝 기술이 10년 이상 수 천명의 과학자들의 믿음직한 파트너가 되고 있습니다. 빠르고 사용하기 간편한 효율적인 TOPO™ 클로닝이 다양한 어플리케이션의 여러 다른 벡터에 적용됩니다.

TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencing Kit 옵션
TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencing은 여러분의 필요에 따라 다양한 competent cells와 함께 구매할 수 있습니다.
  • 일반 클로닝: TOP10 (Cat. No. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
  • 고효율 클로닝: TOP10 Electrocomp™ Cells (Cat. No. K4580-01, K4580-40)
  • 일반 클로닝 박테리오파지 T1 내성: DH5α-T1R (Cat. No. K4595-01, K4595-40)
  • 빠른 성장: Mach1™-T1R Chemically Competent E. Coli (Cat. No. K4530-20)
염기서열분석을 바로 실시할 수 있는 깨끗한 재조합 plasmid 분리에 사용할 수 있는 PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit (Cat. No. K4575-02)가 포함된 키트 버전도 제공합니다.

TOPO™ 제품은 연구용으로만 사용할 수 있습니다. 치료 또는 진단 목적으로 동물이나 사람에게 사용할 수 없습니다.

관련 링크
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
사양
박테리아 또는 효모 균주TOP10
세포 유형Chemically Competent
클로닝 방법TOPO™-TA
용도(애플리케이션)Chromatin Biology
제품라인One Shot
제품 유형Cloning Kit
수량50 Reactions
벡터TOPO-TA Cloning Vectors
형식Kit
프로모터T7, T3
Unit SizeEach
구성 및 보관
Box 1:
• Topoisomerase I-activated pCR™4-TOPO™ vector
• PCR buffer
• Salt solution
• dNTPs
• Control template
• T3, T7, M13 forward, and M13 reverse primers
• Control PCR primers
• Sterile water

Store at -5 to -30°C.
All reagents are stable for 6 months when properly stored.

Box 2:
• One Shot™ Chemically Competent or Electrocomp™ E. coli
• S.O.C. medium
• Supercoiled pUC19 control plasmid

Store at -68 to -85°C.

자주 묻는 질문(FAQ)

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.

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인용 및 참조 문헌 (5)

인용 및 참조 문헌
Abstract
Molecular cloning and characterization of Foxp3 in Atlantic salmon (Salmo salar).
Authors:Zhang Z, Chi H, Niu C, Bøgwald J, Dalmo RA,
Journal:Fish Shellfish Immunol
PubMed ID:21276855
'Foxp3 is a T cell-specific transcription factor and plays a key role in the development of Treg cells and in the immune regulatory process during inflammation. Here we report cloning and characterization of the full-length cDNA of Atlantic salmon Foxp3, which possesses a Forkhead domain, a zinc finger domain and ... More
Detection of cytosine methylation in RNA using bisulfite sequencing.
Authors:Pollex T, Hanna K, Schaefer M
Journal:Cold Spring Harb Protoc
PubMed ID:20889702
'Post-transcriptional RNA modifications are a characteristic feature of noncoding RNAs and have been described for ribosomal RNAs (rRNAs), transfer RNAs (tRNAs), and various other small RNAs. However, the biological function of most of these modifications remains uncharacterized. Cytosine-5 methylation (5mC) has been detected in abundant and long-lived RNA molecules such ... More
Unique DNA methylome profiles in CpG island methylator phenotype colon cancers.
Authors:Xu Y, Hu B, Choi AJ, Gopalan B, Lee BH, Kalady MF, Church JM, Ting AH
Journal:Genome Res
PubMed ID:21990380
'A subset of colorectal cancers was postulated to have the CpG island methylator phenotype (CIMP), a higher propensity for CpG island DNA methylation. The validity of CIMP, its molecular basis, and its prognostic value remain highly controversial. Using MBD-isolated genome sequencing, we mapped and compared genome-wide DNA methylation profiles of ... More
Gene characterized for membrane desaturase that produces (E)-11 isomers of mono- and diunsaturated fatty acids.
Authors: Liu Weitian; Jiao Hongmei; Murray Nancy C; O'Connor Marion; Roelofs Wendell L;
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:11805319
Moth species have evolved integral membrane desaturases that exhibit a wide diversity in substrate specificity, as well as in regiospecificity and stereospecificity of the unsaturated products. We report here the cloning and expression of a single desaturase from the sex pheromone gland of the light brown apple moth, Epiphyas postvittana, ... More
Genome and transcriptome sequencing of lung cancers reveal diverse mutational and splicing events.
Authors:Liu J, Lee W, Jiang Z, Chen Z, Jhunjhunwala S, Haverty PM, Gnad F, Guan Y, Gilbert HN, Stinson J, Klijn C, Guillory J, Bhatt D, Vartanian S, Walter K, Chan J, Holcomb T, Dijkgraaf P, Johnson S, Koeman J, Minna JD, Gazdar AF, Stern HM, Hoeflich KP, Wu TD, Settleman J, de Sauvage FJ, Gentleman RC, Neve RM, Stokoe D, Modrusan Z, Seshagiri S, Shames DS, Zhang Z
Journal:Genome Res
PubMed ID:23033341
Lung cancer is a highly heterogeneous disease in terms of both underlying genetic lesions and response to therapeutic treatments. We performed deep whole-genome sequencing and transcriptome sequencing on 19 lung cancer cell lines and three lung tumor/normal pairs. Overall, our data show that cell line models exhibit similar mutation spectra ... More