BACE1 (β-Secretase) FRET Assay Kit, red

BACE1 (β-secretase)는 알츠하이머병(AD)의 extracellular amyloid plaques에 있는 Amyloid beta-peptides (Abeta) 생성과 관련된 핵심 효소입니다. 어떤 경우 AD 조기 발현을 amyloid precursor protein (APP)의 “Swedish” mutation 으로 설명할 수 있으며 이 단백질 절단이 BACE1으로 크게 증가합니다. 이런 증거와 다른 유전 및 병리적 증거로 BACE1과 gamma-secretase 같은 APP 절단 효소의 억제를 표적하는 치료법이 나오게 되었습니다. BACE1 fluorescence resonance energy transfer (FRET) Assay Kit는 잠재적 BACE1 억제제를 민감하고 효율적으로 스크리닝할 수 있습니다. 이 kit는 “Swedish” mutant에 기초하여 정제된 baculovirus-expressed BACE1와 새로운 red FRET peptide 기질을 사용합니다. BACE1 FRET Assay Kit의 특징:

• 성분 간섭을 줄이는 적색 방출

• 545 nm에서 여기, 585 nm에서 방출 판독

• 용액에서 실시하는 사용하기 쉽고 신속하며 균일한 분석

• high-throughput screening을 위한 다용도 형식

• 결과 안정성–최대 24시간 동안 측정이 가능합니다.

• 확실한 성능dash;Z´=0.67

BACE1 FRET assay의 원리: 이 peptide 기질은 fluorophores 2개와 fluorescent donor (rhodamine (Rh) derivative) 하나, 고유 quenching acceptor가 합성된 것입니다. 이 두 그룹의 거리는 resonance energy transfer라고 알려진 퀀텀 메커니컬 현상을 통해 light excitation에서 donor (D) fluorescence 에너지가 acceptor (A)에 의해 크게 없어지도록 선택되었습니다. protease로 절단 시 fluorophore가 quenching group에서 분리되어 donor의 full fluorescence yield를 복구합니다. 그렇기 때문에 약한 fluorescent peptide substrate이 효소 절단으로 높은 fluorescent이 가능합니다. fluorescence 증가는 proteolysis 비율과 선형 상관관계가 있습니다.BACE1 효소의 출처: ectodomain에 해당하는 인간 BACE1의 아미노산 1-460을 인코딩하는 cDNA sequence가 baculovirus에 감염된 재조합 곤충 세포에서 발현되었습니다. 정제된 BACE1는 proBACE1 형태로 존재하며 겉보기 분자량이 55 kDa이고 N-terminal sequence는 TQHGIRLPLR입니다.성능 및 품질 검사: 효소 순도는 Coomassie ¤ Blue-stained SDS-PAGE gel로 육안 검사 시 90%여야 합니다. kit 프로토콜에 따라 FRET Assay Kit의 BACE1 활성은 25°C 에서 1시간 내에 5-15% 기질 절단이 이루어져야 합니다.