ElectroMAX™ DH10B T1 Phage-Resistant Competent Cells
ElectroMAX™ DH10B T1 Phage-Resistant Competent Cells
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ElectroMAX™ DH10B T1 Phage-Resistant Competent Cells

Las células competentes resistentes al fago T1 ElectroMAX DH10B ofrecen eficacia de transformación de las más altas alcanzadas por cualquierMás información
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Número de catálogoCantidad
120330155 x 100 μl
Número de catálogo 12033015
Precio (MXN)
-
Cantidad:
5 x 100 μl
Las células competentes resistentes al fago T1 ElectroMAX DH10B ofrecen eficacia de transformación de las más altas alcanzadas por cualquier producto que ofrecemos, y pueden exceder de 1 x 1010 cfu/µg de ADN plasmídico en eficacia. Son ideales para aplicaciones que requieren una transformación de alta eficacia, incluida la creación de bibliotecas de ADNc y ADNg. Las células ElectroMAX DH10B:

• Maximizan la producción de los transformantes de productos de clonación limitados
• Permiten la clonación eficaz de ADN metilado.
• Son resistentes a los bacteriófagos T1 y T5
•Admiten la detección azul/blanca mediante una complementación α en placas con X-Gal o Bluo-Gal
• Ofrecen preparaciones plasmídicas de alta producción para aplicaciones posteriores

Bibliotecas representativas resistentes a los fagos a partir de una sola transformación
La mutación tonA en células DH10B ofrecen resistencia a los bacteriófagos T1 y T5, protegiendo valiosas bibliotecas contra la contaminación. Además, las mutaciones en el sistema de restricción dependiente de la metilación (mcrA, mcrBC y mrr) hacen que las células resistentes al fago T1 ElectroMAX DH10B sean ideales para la creación de bibliotecas genómicas de ADN genómico tanto procariota como eucariota, y permiten un rescate plasmídico eficaz de genomas eucariotas. Las células resistentes al fago T1 ElectroMAX DH10B también son adecuadas para la construcción de bancos de genes, la generación de bibliotecas de ADNc mediante vectores derivados de plásmidos y situaciones en las que hay una cantidad limitada de ADN. Esta cepa también tiene el genotipo Φ80lacZΔM15, proporcionando la opción de detección azul/blanca en placas que contienen X-Gal o Bluo-Gal. Finalmente, la mutación endA1 hace que DH10B sea un excelente vehículo para amplificar el ADN plasmídico para su posterior extracción y purificación.

Genotipo: F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG tonA

Encuentre la cepa y el formato que necesite
Las células DH10B están disponibles en formatos tanto electrocompetentes como químicamente competentes. Nuestras células ElectroMAX DH10B también son adecuadas para la construcción de bibliotecas de ADNc o ADNg, pero no son resistentes a la infección por fagos T1 y T5. Nuestras células MegaX DH10B T1R Electrocomp tienen la mayor eficacia de transformación (> 3 x 1010 cfu/µg de ADN plasmídico) y también ofrecen el beneficio de la resistencia a los fagos T1 y T5.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosYes (Streptomycin)
Tramado azul/blancoSí
Clonación de ADN metiladoSí
Clonación de ADN inestableNo es adecuado para clonar ADN inestable
Contiene el episoma F'Carece de episoma F'
Compatibilidad de alto rendimientoNo compatible con alto rendimiento (manual)
Mejora la calidad de los plásmidosSí
PlásmidoSe puede utilizar para plasmidos > 20 kb
Preparación de ADN no metiladoNo es adecuado para preparar ADN no metilado
Línea de productosDH10B, ElectroMAX
Tipo de productoCélula competente
Cantidad5 x 100 μl
Reduce la recombinaciónSí
Condiciones de envíoHielo seco
Resistente al fago T1 (tonA)Sí
Nivel de eficiencia de transformaciónAlta eficacia (> 10^9 ufg⁄µ g)
FormatoTubo
EspecieE. coli
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Contiene:
• Células resistentes al fago T1 ElectroMAX DH10B: 5 viales, 100 µl cada uno
• pUC19 DNA (10 pg/µl): 1 vial, 50 µl
• Medio S.O.C.: 2 frascos, 6 ml cada uno

Almacenar las células competentes a -80 °C. Almacene pUC19 DNA a -20 °C. Almacenar el medio S.O.C. a 4 °C o a temperatura ambiente.

Preguntas frecuentes

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

Citations & References (4)

Citations & References
Abstract
McrA and McrB restriction phenotypes of some E. coli strains and implications for gene cloning.
Authors:Raleigh EA, Murray NE, Revel H, Blumenthal RM, Westaway D, Reith AD, Rigby PW, Elhai J, Hanahan D,
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:2831502
'The McrA and McrB (modified cytosine restriction) systems of E. coli interfere with incoming DNA containing methylcytosine. DNA from many organisms, including all mammalian and plant DNA, is expected to be sensitive, and this could interfere with cloning experiments. The McrA and B phenotypes of a few strains have been ... More
Quantitative evaluation of Escherichia coli host strains for tolerance to cytosine methylation in plasmid and phage recombinants.
Authors:Woodcock DM, Crowther PJ, Doherty J, Jefferson S, DeCruz E, Noyer-Weidner M, Smith SS, Michael MZ, Graham MW,
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:2657660
Many strains of E. coli K12 restrict DNA containing cytosine methylation such as that present in plant and animal genomes. Such restriction can severely inhibit the efficiency of cloning genomic DNAs. We have quantitatively evaluated a total of 39 E. coli strains for their tolerance to cytosine methylation in phage ... More
Properties of the FhuA channel in the Escherichia coli outer membrane after deletion of FhuA portions within and outside the predicted gating loop.
Authors:Killmann H, Benz R, Braun V,
Journal:J Bacteriol
PubMed ID:8955314
Escherichia coli transports Fe3+ as a ferrichrome complex through the outer membrane in an energy-dependent process mediated by the FhuA protein. A FhuA deletion derivative lacking residues 322 to 355 (FhuA delta322-355) forms a permanently open channel through which ferrichrome diffused. This finding led to the concept that the FhuA ... More
Differential plasmid rescue from transgenic mouse DNAs into Escherichia coli methylation-restriction mutants.
Authors:Grant SG, Jessee J, Bloom FR, Hanahan D,
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:2162051
Plasmids comprising transgene insertions in four lines of transgenic mice have been retrieved by plasmid rescue into a set of Escherichia coli strains with mutations in different members of the methylation-dependent restriction system (MDRS). Statistical analysis of plasmid rescue frequencies has revealed that the MDRS loci detect differential modifications of ... More