Sistema de RT-PCR SuperScript™ IV de un paso
Sistema de RT-PCR SuperScript™ IV de un paso
Invitrogen™

Sistema de RT-PCR SuperScript™ IV de un paso

El sistema RT-PCR de un paso Invitrogen SuperScript IV combina la alta procesividad de la transcriptasa inversa (RT) SuperScript IVMás información
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12594100Kit only100 reacciones
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100 reacciones
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El sistema RT-PCR de un paso Invitrogen SuperScript IV combina la alta procesividad de la transcriptasa inversa (RT) SuperScript IV con la alta fidelidad de la ADN polimerasa Platinum SuperFi para proporcionar un rendimiento de RT-PCR de un paso sin precedentes. Con esta práctica formulación en un solo paso más cebadores específicos de genes, puede realizar tanto la síntesis de ADNc a partir de ARN total o ARNm y la amplificación de PCR en un solo tubo.

Las características del sistema RT-PCR SuperScript IV de un paso incluyen:
• Rendimiento superior con sensibilidad de hasta 0,01 pg de ARN, longitud objetivo de hasta 13,8 kb y protocolo RT-PCR de un paso más rápido
• Detección fiable de objetivos incluso con muestras de ARN subóptimas puras
• Mecanismo de activación de inicio en caliente de dos fases para una alta sensibilidad, especificidad y configuración de temperatura ambiente

SuperScript IV RT es un mutante MMLV RT patentado con mayor procesividad, termoestabilidad y resistencia a inhibidores, así como una reducción de la actividad de ARNasa H, para una síntesis sensible y eficaz de ADNc de longitud completa. La ADN polimerasa Platinum SuperFi es una ADN polimerasa de corrección que combina una fidelidad superior con la tecnología de inicio en caliente Platinum de confianza para obtener los mejores resultados con la PCR. La combinación de estas dos enzimas de ingeniería produce rendimientos y fidelidad de RT-PCR mejorados, así como la amplificación de moldes más largos en comparación con otros kits de RT-PCR de un paso.

Para un rendimiento aún mejor, ofrecemos elSistema RT-PCR SuperScript IV de un paso con DNAasa ez. La ezDNase mejora aún más el flujo de trabajo de RT-PCR en un solo paso a través de un paso de eliminación de ADN genómico extremadamente simplificado que garantiza la máxima precisión y confianza en los resultados de RT-PCR en un solo paso.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPCR amplificada, ADNc
FormatoKit
Inicio en calienteInicio en caliente integrado
IncluyeKit only
N.º de reacciones100 reacciones
Temperatura óptima de reacciónDe 45 °C a 60 °C
PolimerasaPlatinum SuperFi
CantidadEach
Formato de reacciónMezcla maestra
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaSuperScript IV
Actividad de la ribonucleasa HReducido
Condiciones de envíoHielo seco
Tamaño (producto final)Hasta 14 kb
Material de partidaARN
TécnicaRT-PCR de 1 pasos
Método de detecciónSonda de cebado
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Método de PCRRT-qPCR de 1 paso
Velocidad de reacción10 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento

• Mezcla SuperScript IV RT (50 μl)
• Mezcla maestra de RT-PCR 2X Platinum SuperFi (2 x 1,25 ml)
• Agua sin nucleasas (2 x 1,25 ml)

Almacenar a –20 °C.

Preguntas frecuentes

In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will ezDNase be active to affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50 degrees C). The additional inactivation step is therefore not required for most RT-qPCR applications. If the RNA sample is to be used for RT-PCR of fragments ≥3 kb, incubate the sample for 5 minutes at 55 degrees C in the presence of 10 mM DTT to inactivate the enzyme.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix (Cat. No. 11756050). The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only difference is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced to 10 minutes and inactivation time has been reduced to 5 minutes at 85 degrees C.

Can I get comparable cDNA yield and length using the SuperScript IV RT 10-minute protocol as when using the 50-minute protocol for SuperScript III RT?

When compared with SuperScript III RT (and other manufacturers’ RTs) in a synthesis reaction for a 9 kb cDNA, SuperScript IV RT performed successful synthesis in just 10 minutes and did so with comparable (or improved) yield (as shown by gel band density).

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

Do you offer a one-step RT-qPCR kit containing SuperScript IV RT?

SuperScript IV RT is not recommended for one-step RT-qPCR applications. However, it is included in end-point one-step RT-PCR kits: https://thermofisher.com/ssiv-onestep

For one-step RT-qPCR, we recommend SuperScript III Flash Reverse Transcriptase or TaqPath RT-qPCR Master Mix products.