El kit de «pull-down» y detección de Cdc42 activo Thermo Scientific es un kit completo para el enriquecimiento selectivo y la detección de Cdc42 GTPasa unida a GTP a través de una interacción específica de proteínas con el dominio de unión de proteínas de Pak1.

El kit de «pull-down» y detección de Cdc42 activo incluye dominio de unión de proteínas (PBD) GST-Pak1 purificado, resina de glutatión agarosa, controles positivos y negativos (GTPγS y GDP, respectivamente), tampón de lisis/unión/lavado, anticuerpo primario anti-Cdc42, tampón de muestra, columnas de centrifugado y tubos de recogida. El kit fue validado usando lisados de células NIH 3T3, una línea celular que es conocida por tener una fuerte actividad Cdc42.

Características del kit de detección y «pull-down» de Cdc42 activo:

• Gran sensibilidad y precisión: los reactivos optimizados, el anticuerpo anti-Cdc42 específico y el procedimiento Western blot garantizan unos controles precisos y resultados semicuantitativos
• Validado: funcionalmente probado para la detección de Cdc42 para garantizar la calidad y el rendimiento
• Compatible: eficaz con una variedad de tipos de células de ratón, rata y fuentes humanas

Aplicaciones:
• Seguimiento de la activación de Cdc42 GTPasa durante la diferenciación celular, la migración, la división y la reordenación citoesquelética
• Estudio de la activación de Cdc42 durante la formación de filopodia
• Supervisión de la actividad de Cdc24 después de la estimulación con factores de crecimiento
• Cribaje de los inhibidores de moléculas pequeñas para ver sus efectos en la actividad de Cdc42

El kit activo de «pull-down» y detección de Cdc42 se validó para la función y especificidad del método de enriquecimiento Cdc42 activo utilizando lisados celulares tratados con GTPγS para activar el Cdc42 endógeno y se comparó con lisados tratados con GDP para inactivar la pequeña GTPasa. El tratamiento con GTPγS atrapa Cdc42 en la forma activa ligada al GTP, dando como resultado una señal fuerte cuando está presente el Cdc42 endógeno. El tratamiento del GDP empuja a Cdc42 a un estado de unión inactivo al GDP, dando como resultado una señal mínima o nula, independientemente de los niveles de proteína Cdc42. Este kit está optimizado para la detección de Western blot con un anticuerpo secundario conjugado con HRP (IgG de cabra antirratón, n.° de pieza 31430) y el sustrato quimioluminiscente Thermo Scientific SuperSignal West Pico (n.° de pieza 34080). El kit contiene suficientes componentes para 30 ensayos de extracción.

Fondo de Cdc42:
La familia GTPasa de Rho tienen muchas funciones celulares, incluyendo la señalización celular, regulación transcripcional y organización del citoesqueleto de actina. Esta familia de GTPasa comprende Rho (RhoA, RhoB y RhoC), Rac (Rac1, Rac2, Rac3 y RhoG), Cdc42 (Cdc42 y G25K), Rnd (Rnd1, Rnd2 y RhoE/Rnd3), RhoBTB y la familia Miro. Estas GTPasa permiten la transducción de señales desde la membrana plasmática al citosol a través de GPCR, tirosina cinasa, citoquinas y receptores de adhesión. La adhesión a la membrana plasmática se logra a través de las modificaciones de lípidos de geranilgeranil en el terminal carboxílico de la proteína. La activación de Cdc42 da como resultado la polimerización de los filamentos de actina y la formación de filopodia.

La subfamilia Cdc42 de RhoGTPasa se ha caracterizado menos que las familias Rho y Rac. Tanto Cdc42 como Rac1 se activan a través de la señalización de la cinasa del receptor de tirosina que conduce a la activación de la vía de la cinasa de estrés SAPK y p38. Cdc42 también se activa mediante el quimioatrayente fMLP en los neutrófilos. La fibronectina activa Cdc42 y Rac1 para inducir la propagación celular y la estimulación con TNF-alfa e IL-1 produce cambios en el citoesqueleto de la actina. Hay una diafonía significativa entre Cdc42 y Rac1, ya que actúan en vías superpuestas y, en algunos casos, Cdc42 puede actuar antes que Rac1 durante la transducción de señales. Algunas de las principales proteínas efectoras de Cdc42 son Pak1, N-WASP e IQGAP. Pak1 es una cinasa implicada en la activación del JNK en la vía de estrés SAPK. N-WASP es un efector que induce la formación de filopodia, e IQGAP interactúa con los filamentos de F-actina. En la diferenciación de las neuronas, Cdc42 juega un papel activo en el crecimiento de neuritos. Sin embargo, la familia Rho de GTPasas puede tener un comportamiento agonista durante la señalización celular y antagonista durante la diferenciación.

Más datos de producto
• Mida la activación de las GTPasas pequeñas a través de sus efectores descendentes específicos