Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit
Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Gaussia Luciferase Glow Assay Kit

El kit de ensayo de brillo de luciferasa de Gaussia Thermo Scientific Pierce proporciona una señal bioluminiscente extremadamente brillante yMás información
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Precio (MXN)
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El kit de ensayo de brillo de luciferasa de Gaussia Thermo Scientific Pierce proporciona una señal bioluminiscente extremadamente brillante y estable (vida media superior a 1 hora), especialmente en presencia del indicador de luciferasa de Gaussia-Dura.

Características del kit de ensayo de brillo de luciferasa de Gaussia:

Sensible: detección muy sensible de la actividad de la luciferasa de Gaussia
Estable: mayor estabilidad de la señal
Simple: no requiere un luminómetro con inyectores
Compatible: reactivos de ensayo compatibles con otras luciferasas de Gaussia
Compatible con la automatización: adecuado para ensayos de alto rendimiento
Práctico: contiene un tampón de lisis celular universal y un reactivo de ensayo de brillo optimizado
Seguro: permite realizar ensayos no radioactivos

Este kit de ensayo de brillo de luciferasa Pierce contiene reactivos para medir la actividad de la luciferasa de Gaussia en medios de cultivo celular y lisados de mamíferos. Cuando se utiliza con vectores de luciferasa de Gaussia-Dura Thermo Scientific, el kit proporciona un sistema de ensayo de indicador bioluminiscente extremadamente sensible para la detección secretada o intracelular de la actividad de la luciferasa con una mayor estabilidad de señal. La salida de luz generada por la reacción de la luciferasa puede correlacionarse con la cantidad de proteína de la luciferasa producida, que a su vez es proporcional a la actividad del promotor de la expresión de conducción de la luciferasa. El kit se puede utilizar para detectar la actividad de cualquier luciferasa de Gaussia o derivados que utilizan coelenterazina como sustrato.

Incluye:
Tampón de lisis celular, tampón y sustrato de reacción

Requiere:
Luciferasa de Gaussia y luminómetro u otro instrumento capaz de monitorizar la luminiscencia, como los lectores de microplacas Thermo Scientific Luminoskan Ascent y Varioskan Flash.

Aplicaciones:
• Estudios promotores para analizar los elementos reguladores en cis y los factores de la transacción
• Cribaje de medicamentos
• Cribaje de ARNip y ARNmi
• Ensayos multiplex para estudiar efectos inespecíficos
• Ensayos de transmisión de ruta secretora/localización de proteína
• Análisis de la vía de transducción de señal
• Estudios de ARN splicing

La luciferasa Gaussia es una proteína de 20 kDa del copépodo marino Gaussia princeps. La enzima bioluminiscente está altamente segregada en los medios de cultivo celular, lo que permite el control de células vivas de la actividad del indicador. La salida de luz generada por la reacción de luciferasa puede correlacionarse con la cantidad de proteína de luciferasa de Gaussia producida y utilizada para determinar la actividad del promotor de la expresión de conducción Gaussia. La señal que produce la luciferasa de Gaussia muestra una fuerte cinética de flashes y es considerablemente mayor que las señales de flashes de las luciferasas de luciérnaga o Renilla analizadas en condiciones similares.

El gen Gaussia-Dura que se utiliza en los vectores de luciferasa de gen Gaussia-Dura Thermo Scientific es un derivado del gen natural de Gaussia y proporciona una luminosidad de la misma intensidad pero más estable. El reactivo del kit de ensayo de brillo de Gaussia produce una reacción de luciferasa de Gaussia-Dura con cinética de tipo incandescente y se recomienda para luminómetros sin inyectores o para aplicaciones que requieren procesamiento por lotes de muestras.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
ensayoEnzima indicadora, ensayo de indicador de luciferasa
Células compatiblesCélulas de mamíferos
Método de detecciónBioluminiscente
Para utilizar con (equipo)Luminómetro (microplaca)
FormatoPlaca de 384 pocillos, placa de 96 pocillos
Tipo de etiquetaEnzima etiquetada
Línea de productosPierce
Cantidad100 reacciones
SustratoCoelenteracina
Propiedades de sustratoSustrato químico
Tipo de sustratoSustrato de luciferasa
Suficiente para100 ensayos de luciferasa
ObjetivoLuciferasa, luciferasa Gaussia
TécnicaQuimioluminiscencia mejorada
PromotorEF-1α
TipoKit de ensayo
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Suficiente para: 100 ensayos de luciferasa en pocillos de microplaca
• Tampón de ensayo Glow Gaussia, 5 ml (almacenar a 4 °C)
• Coelenterazina 100X, 50 µl (almacenar a -80 °C)
• Tampón de lisis celular de luciferasa (2X), 6 ml (almacenar a temperatura ambiente)

El kit puede almacenarse a -80 °C o individualmente a las temperaturas indicadas.

Preguntas frecuentes

I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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    Why am I getting a low signal in lysate using a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Can you provide some suggestions?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-optimized lysis buffer used: Assay luciferase activity in the media to confirm good expression of luciferase; Use only the provided lysis buffer.
    - Low luciferase expression: Lyse cells in smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale up volume of sample and reagent per well.

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    I got a low signal in media when I used a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What happened?

    Here are possible causes and solutions:

    - Insufficient luciferase accumulation in media: Incubate cells for a longer time.
    - Low luciferase expression: Use less media per well during the experiment;.Use a different promoter or growth conditions to improve expression;.Increase the integration time on the instrument;.Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Treatment interfered with cellular secretory pathway: Transfect cells with a plasmid for constitutive expression of Luciferase (i.e., with pTK or pCMV promoter); Determine if luciferase actively expresses in media without treatment. Add treatment; Determine if there is a corresponding drop in luciferase activity from the constitutively expressed plasmid.

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    I am getting no signal with my Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - Substrate auto-oxidized: Protect substrate from light and air; Maintain 100X Coelenterazine at -80 degrees C; maintain 100X Vargulin at -80 degrees C; Prepare new Coelenterazine Working Solution if used longer than 8 hours; Prepare new Vargulin Working Solution if used longer than 2 hours

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