Pierce™ Cypridina Luciferase Flash Assay Kit
Pierce™ Cypridina Luciferase Flash Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Cypridina Luciferase Flash Assay Kit

El kit de ensayo flash de luciferasa de Cypridina Thermo Scientific Pierce proporciona a los investigadores un ensayo de altaMás información
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16168Kit de 100 reacciones
16169Kit para 1000 reacciones
Número de catálogo 16168
Precio (MXN)
-
Cantidad:
Kit de 100 reacciones
El kit de ensayo flash de luciferasa de Cypridina Thermo Scientific Pierce proporciona a los investigadores un ensayo de alta sensibilidad para la actividad transcripcional de elementos reguladores en medios de cultivo celular de mamíferos y lisado celular completo.

Características del kit de ensayo flash de luciferasa de Cypridina:

Sensible: la alta sensibilidad permite la utilización de un número menor de células
Rentable: los ensayos sensibles dan como resultado un menor consumo de reactivos
Luciferasa segregada: permite ensayos en tiempo real y estudios cinéticos sin destruir células
Ideal para la cotransfección: utiliza un sustrato diferente al de las luciferasas de Renilla, Gaussia o luciérnaga
Compatible: reactivos de ensayo compatibles con otras luciferasas de Cypridina o de Vargula
Ahorro de tiempo: los ensayos que utilizan luciferasas segregadas requieren una manipulación mínima de las muestras
Fácilmente automatizable: compatible con la detección de alto rendimiento
Práctico: contiene un tampón de lisis celular universal y reactivos de ensayo flash optimizados
Seguro: permite realizar ensayos no radioactivos

Este kit de ensayo flash contiene reactivos para medir la actividad de luciferasa de Cypridina en medios de cultivo de células de mamíferos y lisados. Cuando se utiliza con los vectores de luciferasa de Cypridina de Thermo Scientific, el kit proporciona un sistema de ensayo bioluminiscente extremadamente sensible para la detección de secreción o intracelular de la actividad promotora o de la actividad de la vía. La luciferasa de Cypridina está altamente segregada en los medios de cultivo celular, lo que permite el control de células vivas de la actividad del indicador. La señal producida por Cypridina es considerablemente mayor que la señal de luciferasas de luciérnaga o de Renilla analizadas en condiciones similares.

Incluye:
Tampón de lisis celular, tampón de reacción y sustrato

Requiere:
Luciferasa de Cypridina y luminómetro u otro instrumento capaz de controlar la luminiscencia, como los lectores de microplacas Luminoskan Ascent y Varioskan Flash de Thermo Scientific.

Aplicaciones:
• Estudios promotores para analizar los elementos reguladores en cis y los factores de la transacción
• Cribaje de medicamentos
• Cribaje de ARNip y ARNmi
• Ensayos multiplex para estudiar efectos inespecíficos
• Ensayos de transmisión de ruta secretora/localización de proteínas
• Análisis de la vía de transducción de señal
• Estudios de ARN splicing

La luciferasa Cypridina es una proteína de 61 kDa del ostrácodo marino Cypridina noctiluca. La luciferasa de Cypridina está altamente segregada en los medios de cultivo celular, lo que permite el control de células vivas de la actividad del indicador. La salida de luz captada con un luminómetro puede correlacionarse con la cantidad de proteína de luciferasa de Cypridina producida y utilizada para determinar la actividad del promotor de la expresión de conducción Cypridina. El gen Cypridina en los vectores de luciferasa de Cypridina de Thermo Scientific se modifica para su expresión en células de mamíferos.

El kit de ensayo está optimizado para su uso con nuestros vectores de luciferasa de Cypridina, pero es totalmente compatible con todas las luciferasas que utilizan Vargulina como sustrato. Debido a que la Cypridina utiliza un sustrato diferente al de la Renilla, la Gaussia o al de las luciferasas luciérnaga, es posible la cotransfección y los ensayos con hasta tres indicadores. La señal producida por la Cypridina muestra una fuerte cinética de flash y es considerablemente mayor que las señales de flash de luciferasas firetas o de Renilla analizadas en condiciones similares.

Más datos del producto
Ensayos de multiplexado de indicadores de luciferasa de alta sensibilidad
Ensayos de luciferasa en células Jurkat difíciles de transfección
Supervisión de la diferenciación neuronal mediante indicadores de luciferasa multiplexados
Activación de la vía de respuesta antioxidante mediante productos químicos pesticidas
Luciferasas versátiles: luminómetros de microplacas y ensayos de luciferasa flash

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
ensayoEnzima indicadora, ensayo de indicador de luciferasa
Células compatiblesCélulas de mamíferos
Método de detecciónBioluminiscente
Para utilizar con (equipo)Luminómetro (microplaca)
FormatoPlaca de 384 pocillos, placa de 96 pocillos
Tipo de etiquetaEnzima etiquetada
Línea de productosPierce
CantidadKit de 100 reacciones
SustratoVargulina (cipridina luciferina)
Propiedades de sustratoSustrato químico
Tipo de sustratoSustrato de luciferasa
ObjetivoLuciferasa, cipridina luciferasa
TécnicaQuimioluminiscencia mejorada
TipoKit de ensayo
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
• Tampón de ensayo Flash cipridina, 5 ml, almacenar a 4 °C
• Vargulina (1X), 5 µl, almacenar a -20 °C
• Tampón de lisis celular 2X, 6 ml, almacenar a temperatura ambiente

Tras su recepción, almacene el kit a -20 °C o almacene los componentes individuales como se ha indicado con anterioridad.

Preguntas frecuentes

I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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    Why am I getting a low signal in lysate using a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Can you provide some suggestions?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-optimized lysis buffer used: Assay luciferase activity in the media to confirm good expression of luciferase; Use only the provided lysis buffer.
    - Low luciferase expression: Lyse cells in smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale up volume of sample and reagent per well.

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    I got a low signal in media when I used a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What happened?

    Here are possible causes and solutions:

    - Insufficient luciferase accumulation in media: Incubate cells for a longer time.
    - Low luciferase expression: Use less media per well during the experiment;.Use a different promoter or growth conditions to improve expression;.Increase the integration time on the instrument;.Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Treatment interfered with cellular secretory pathway: Transfect cells with a plasmid for constitutive expression of Luciferase (i.e., with pTK or pCMV promoter); Determine if luciferase actively expresses in media without treatment. Add treatment; Determine if there is a corresponding drop in luciferase activity from the constitutively expressed plasmid.

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    I am getting no signal with my Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - Substrate auto-oxidized: Protect substrate from light and air; Maintain 100X Coelenterazine at -80 degrees C; maintain 100X Vargulin at -80 degrees C; Prepare new Coelenterazine Working Solution if used longer than 8 hours; Prepare new Vargulin Working Solution if used longer than 2 hours

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