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La fosfatasa alcalina bacteriana (BAP) hidroliza los 3´ y 5´-fosfato del ADN y ARN. El BAP está activo a 65 °C durante al menos 1 h y se inactiva mediante la extracción de fenol. Aplicaciones: Desfosforilación de extremo 5´-fosforilado de ADN vectorial para prevenir la autoligación. Desfosforilación de extremo 5´ de ácidos nucleicos antes de la reacción directa con quinasa. Fuente: Purificado a partir de E. coli C90. Pruebas de rendimiento y calidad: Ensayos de endodesoxirribonucleasa, exodesoxirribonucleasa y ribonucleasa; desfosforilación se determinó la eficiencia. Definición de la unidad: Una unidad hidroliza 1 nmol de ATP en 30 min. a 37 °C. Condiciones de reacción de la unidad: 10 mm de Tris-HCl (pH 8,0), 1,5 mm de [γ-32P]ATP, y enzima en 50 µl durante 30 min. a 37 °C
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de productoFosfatasa alcalina
Cantidad2500 U
Condiciones de envíoHielo húmedo
EnzimaBAP
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
La fosfatasa alcalina bacteriana se suministra con un vial de 10X de tampón de desfosforilación [100 mM de Tris-HCl (pH 8,0)]. Almacenar a -20 °C.
Preguntas frecuentes
Why are alkaline phosphatases used in cloning protocols? What is a typical protocol for dephosphorylation of nucleic acids?
Alkaline phosphatases are used to dephosphorylate the 5' ends of DNA. In cloning, it is used to prevent self-ligation of vector DNA. Standard ligation of DNA with ligase requires a 5' phosphate to be present on at least one of the ends being joined. When a DNA insert containing phosphates on both 5' termini is added to a dephosphorylated vector, the insert will be efficiently ligated into the vector, but the vector will not be able to self-ligate. Thus, dephosphorylation of vector lowers the number of background colonies containing vector without insert.