SuperMix de síntesis de primera cadena SuperScript™ III

El sistema de síntesis para primera cadena SuperScript™ III SuperMix es una formulación optimizada del SuperMix para la síntesis de la primera cadena de cADN a partir de poli (A)⁺ purificado del ARN total. Con este sistema, pueden detectarse objetivos de ARN de 100 bp a >12 kb. La cantidad de material inicial puede variar de 0,1 pg a 5 µg de ARN total.

Uso del sistema de síntesis para primera cadena SuperScript™ III SuperMix
El kit incluye la mezcla de enzimas SuperScript™ III o RNaseOUT™, la mezcla para la reacción de síntesis de primera cadena 2X y un tampón de recocido. La transcriptasa inversa SuperScript™ III, incluida en la mezcla de enzimas, es una versión de la transcriptasa inversa de virus de leucemia murina Moloney (M-MLV) que se ha diseñado para reducir la actividad de la ribonucleasa (ARNasa) H y proporcionar mayor estabilidad térmica. La enzima se puede utilizar para sintetizar ADNc en un intervalo de temperatura de 45–55 °C, y proporcionar una mayor especificidad, mayor producción de ADNc y más cantidad de producto de cadena completa que otras transcriptasas inversas. Como la transcriptasa inversa SuperScript™ III no se ve significativamente inhibida por el ARN de transferencia y ribosómico, se puede emplear para sintetizar ADNc de ARN total. El inhibidor de ARNasa recombinante RNaseOUT™ se incluye en la mezcla de enzimas para la protección contra la degradación del ARN objetivo por la contaminación de la ribonucleasa. La mezcla de reacción de primera cadena 2X incluye 10 mm de MgCl₂ y 1 mm de cada desoxinucleótido (dNTP) en una solución de tampón que se ha optimizado para la síntesis de primera cadena de ADNc. El tampón de hibridación se utiliza en el paso inicial de anillaje del cebador. También se suministran tubos independientes de oligo(dT)₂₀ y hexámeros al azar. La síntesis de ADNc se puede realizar con ARN total o ARN seleccionado mediante poli (A)⁺ con cebadores aleatorios oligo(dT) o un cebador específico del gen.