La proteína A agarosa Thermo Scientific Pierce es una proteína A de resina de agarosa granulada de capacidad estándar para su uso en diversos métodos de purificación de anticuerpos por afinidad.

Características de la proteína A agarosa:

• Proteína A nativa: la proteína A inmovilizada es idónea para la purificación de la IgG policlonal a partir de suero humano, de conejo, de cerdo, de perro o de gato.
• Resina de agarosa: el soporte es agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B), la resina más utilizada en métodos de purificación de proteínas por afinidad.
• Inerte y estable: el excelente método de fabricación inmoviliza la proteína A mediante enlaces covalentes resistentes a la lixiviación y sin carga, lo que produce una unión no específica y posibilita que se use varias veces sin que afecte al rendimiento.
• Capacidad estándar: la proteína A agarosa Pierce tiene una carga normal de proteína A inmovilizada, lo que proporciona una capacidad de unión de 12 a 19 mg de IgG de humano por ml de resina (aproximadamente entre 6 y 8 mg de IgG de ratón por ml de resina).

La proteína A agarosa Pierce consta de proteína A nativa purificada que se ha inmovilizado covalentemente en agarosa granulada entrecruzada al 6 % de alta calidad. Los gránulos de agarosa tienen propiedades fisicoquímicas que permiten su uso en distintos procedimientos de purificación por afinidad en columnas o en lotes.

La proteína A es un componente de la pared celular producido por diversas cepas de Staphylococcus aureus. La proteína de 46,7 kDa consta de una única cadena polipeptídica que no contiene hidratos de carbono. La proteína A nativa tiene cuatro sitios de unión de gran afinidad (Ka = 10^8/mol) capaces de interactuar con la región Fc de anticuerpos de la clase IgG de determinadas especies de mamíferos. La función de unión a IgG es óptima a un pH de 8,2; no obstante, también se produce una unión eficaz en tampones neutros y fisiológicos (pH de 7,0 a 7,6).

La proteína A es una proteína derivada de una bacteria que se une con gran afinidad y especificidad a la porción Fc de los anticuerpos, especialmente a los de la clase IgG. Comparada con su alternativa (la proteína G), la proteína A tiene la mayor capacidad de unión a las subclases de IgG de conejos, cerdos, perros y gatos. La proteína A tiene también una mayor capacidad de unión con la IgG humana, con la excepción de IgG3, con la que se une de forma débil. La proteína A se une débilmente a la IgG1 de ratón y no se recomienda para la mayoría de aplicaciones con ese isotipo de anticuerpo.

La proteína A agarosa Pierce se prepara con el procedimiento químico de acoplamiento Thermo Scientific AminoLink, que ofrece varias ventajas en comparación con los métodos tradicionales de inmovilización de ligandos. La inmovilización AminoLink da como resultado la conjugación entre los monómeros de azúcar de los gránulos de agarosa y los restos de lisina nativa de la proteína A mediante enlaces amida simples. A diferencia de la inmovilización habitual con bromuro de cianógeno (CNBr), el método AminoLink, que no introduce ningún grupo químico nuevo que pudiera causar uniones inespecíficas no deseadas, produce una unión estable y fundamentalmente irreversible. El resultado es una resina de gran capacidad de unión que mantiene la proteína A inmovilizada funcional después de varias series de purificación de anticuerpos.

Propiedades de la agarosa en gránulos al 6 % entrecruzada (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 de daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar (Nota: Es posible que la presión manométrica indicada en el aparato de cromatografía líquida se refiera a la presión total del sistema en lugar de a la caída de presión en la columna).

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