Pierce™ Recombinant Protein A Agarose

La proteína A agarosa recombinante Thermo Scientific Pierce es una resina de agarosa granulada a la que se le ha inmovilizado una forma de proteína A modificada genéticamente para su uso en aplicaciones de purificación de IgG en las que el ligando nativo tiene efectos no deseados.

Características de la proteína A-agarosa recombinante:

• Proteína A inmovilizada: se une específicamente a las IgG de varias especies de mamíferos, sobre todo a la mayoría de los subtipos de IgG de humano y de conejo.
• Capacidad estándar: la carga de la proteína A inmovilizada proporciona una capacidad de unión de 15 a 17 mg de IgG de humano por mililitro de resina.
• Resina de agarosa: incorpora agarosa en gránulos al 6 % entrecruzada para métodos de purificación por afinidad a granel y de columnas pequeñas.

La proteína A-agarosa Pierce recombinante utiliza una forma genéticamente modificada de proteína A que se produce en E. coli y luego se inmoviliza en agarosa granulada al 6 % entrecruzada (CL-6B). Aunque se han eliminado algunas regiones no esenciales, la recombinante es similar a la proteína A nativa en tamaño total y los dominios de unión de IgG. La proteína tiene cuatro puntos de unión de alta afinidad capaces de unirse específicamente a la región Fc a partir de moléculas de inmunoglobulina de varias especies.

La proteína A recombinante se produce en E. coli y funciona básicamente igual que la proteína A nativa de Staphylococcus aureus. La molécula de proteína A contiene cuatro puntos de unión de alta afinidad (Ka= 10^8/mol) capaces de interactuar con la región Fc a partir de la IgG de varias especies, incluyendo humanos y conejos.

Algunos investigadores prefieren utilizar una resina de afinidad basada en la forma recombinante de la proteína A en aplicaciones específicas donde la experiencia práctica indica que la diferente fuente de producción (E. coli frente a S. aureus) proporciona una unión menos inespecífica o niveles más bajos de contaminación por endotoxinas. De lo contrario, las resinas de proteína A nativas generalmente proporcionan una mayor capacidad de purificación de anticuerpos.

Propiedades de la agarosa en gránulos al 6 % entrecruzada (CL-6B):
• Estabilidad pH del soporte: de 2 a 14 (corto plazo); de 3 a 13 (largo plazo)
• Tamaño medio de partícula: de 45 a 165 micrómetros
• Límite de exclusión: de 10.000 a 4.000.000 de daltons
• Caudal volumétrico máximo: aprox. 1 ml/minuto (en una columna de 1 cm de diámetro)
• Velocidad lineal máxima: 30 cm por hora
• Presión máxima: menos de 25 psi (1,5 bar), definida como la máxima caída de presión en una columna que la resina puede soportar. (Nota: Es posible que la presión manométrica indicada en el aparato de cromatografía líquida se refiera a la presión total del sistema en lugar de a la caída de presión en la columna).

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