El reactivo A de ensayo de proteínas BCA es un componente del kit de ensayo de proteínas de ácido bicinconínico (BCA) Pierce, un ensayo con dos componentes, de alta precisión y compatible con los detergentes que se emplea para determinar la concentración de proteínas totales con respecto a un patrón de proteínas. Los reactivos BCA Pierce proporcionan una determinación precisa de la concentración de proteínas con la mayoría de los tipos de muestras que se encuentran en la investigación de proteínas. El ensayo de BCA Pierce puede utilizarse para evaluar la producción en lisados de células completas, fracciones de columnas de afinidad y muestras de proteínas purificadas, así como para supervisar la contaminación proteica en aplicaciones industriales. En comparación con la mayoría de los métodos de unión al colorante, el ensayo de BCA se ve mucho menos afectado por las diferencias de composición de proteínas, lo que proporciona una mayor precisión de la concentración.

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Las características del kit de ensayo de proteínas BCA Pierce (reactivos A y B) incluyen:
• Colorimétrico: estime visualmente o mida con un espectrofotómetro estándar o un lector de placas a 562 nm
• Uniforme: exhibe menos variación de proteína a proteína que los métodos de unión de colorante (Bradford)
• Compatible: inafectado por las concentraciones típicas de la mayoría de detergentes iónicos y no iónicos
• Tiempo de ensayo: incubación de 30 minutos; mucho más fácil y cuatro veces más rápido que los métodos clásicos Lowry
• Intervalo de ensayo: intervalo de trabajo lineal para BSA de 20 a 2000 µg/ml
• Sensibilidad: detecta hasta 5 µg/ml con el protocolo mejorado

Cómo funciona el ensayo
El ensayo de proteínas BCA combina la conocida reducción de Cu²⁺ a Cu¹⁺ por proteína en un medio alcalino con la detección colorimétrica altamente sensible y selectiva del catión cuproso (Cu¹⁺) por ácido bicinconínico (BCA). El primer paso es la quelación del cobre con proteína en un entorno alcalino para formar un complejo de color azul claro. En esta reacción, conocida como la reacción de biuret, péptidos que contienen tres o más residuos aminoácidos forman un complejo de quelato de colores con iones cúpricos en un entorno alcalino que contiene tartrato de sodio y potasio.

En el segundo paso de la reacción de desarrollo de color, BCA reacciona con el catión reducido (cuproso) que se formó en el primer paso. El producto de la reacción con un intenso color púrpura es el resultado de la quelación de dos moléculas de BCA con un ion cuproso. El complejo de cobre/BCA es soluble en agua y presenta una fuerte absorbencia lineal a 562 nm con un aumento de la concentración de proteínas. El complejo es aproximadamente 100 veces más sensible (límite de detección inferior) que el color azul claro de la primera reacción.

La reacción está muy influenciada por cuatro residuos de aminoácidos (cisteína, cistina, tirosina y triptófano) en la secuencia de aminoácidos de la proteína. Sin embargo, a diferencia de los métodos de unión de colorante Coomassie, la cadena principal del péptido universal también contribuye a la formación de color, por lo que ayuda a minimizar la variabilidad causada por diferencias composicionales de las proteínas.

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