SDA (NHS-Diazirine) (succinimidyl 4,4'-azipentanoate)

Thermo Scientific Pierce SDA (NHS-Diazirina) combina pruebas químicas de fotoacción basadas en ésteres NHS y diazirina con moléculas conjugadas que contienen aminas con casi cualquier otro grupo funcional mediante la activación de luz UV de onda larga. Un brazo espaciador de 3,9Å espacia los dos grupos fotorreactivos.

Características de SDA (NHS-Diazirina):

• Permeable a membrana: apto para entrecruzado de proteínas intracelulares in vivo
• Heterobifuncionales: el grupo de ésteres NHS reacciona con aminas primarias a pH 7-9 para formar un enlace de amida covalente; El grupo de diazirina (azipentanoato) reacciona eficazmente con cualquier cadena lateral de aminoácidos o columna vertebral de péptidos tras la activación con luz UV de onda larga (330-370 nm)
• Controlable: se activa el entrecruzado en dos pasos utilizando lámparas UV comunes de laboratorio
• Fácil de usar: estos entrecruzados son fotoestables en condiciones típicas de iluminación de laboratorio, por lo que no hay necesidad de realizar experimentos en la oscuridad
• Mejor que las azidas de arilo: el grupo de diazirina fotorreactiva tiene mejor fotoestabilidad en luz normal que los grupos de fenil azida de entrecruzados fotorreactivos tradicionales; sin embargo, el grupo de diazirina es más eficiente activado por la luz UV de onda larga

Los reactivos de succinimidil-diazirina (SDA) son una nueva clase de entrecruzadores que combinan química reactiva a la amina probada con una fotoquímica basada en diazirina innovadora y eficiente para conjugar moléculas que contienen aminas a casi cualquier otro grupo funcional. Los entrecruzadores SDA incluyen seis compuestos que difieren en las longitudes del brazo espaciador, la capacidad de dividir las proteínas entrecruzadas y la presencia o ausencia de un grupo cargado para la permeabilidad de la membrana. El entrecruzamiento de proteínas es una técnica importante que se utiliza para entender la estructura de las proteínas y para estabilizar las interacciones proteína-proteína, y estos reactivos SDA amplían la eficacia y la gama de interacciones que se pueden explorar mediante este enfoque.

Los entrecruzadores reactivos a la amina o sulfhidrilo bifuncionales típicos requieren grupos específicos de aminoácidos (por ejemplo, lisina o cisteína) a la distancia correcta en ambas proteínas para capturar interacciones de proteínas. Los entrecruzadores SDA evitan esta limitación permitiendo el marcado específico de una proteína usando el éster N-hidroxisuccinimida (NHS) reactivo a la amina seguido de entrecruzamiento activado por UV a través de la selección de diazirina a cualquier cadena lateral de aminoácidos o columna vertebral del péptido de una segunda proteína. Los fotoentrecruzadores a base de diazirina tienen mejor fotoestabilidad que los fotoentrecruzadores a base de fenil azida y se activan fácilmente con luz UV de onda larga (330-370 nm).

Múltiples entrecruzadores de diazirina disponibles
Los derivados de diazirina de éster NHS (SDA, LC-SDA y SDAD) carecen de un grupo cargado y son permeables a la membrana. Esta propiedad los hace ideales para conjugaciones intracelulares e intramembrales. Por el contrario, Sulfo-SDA, Sulfo-LC-SDA y Sulfo-SDAD contienen grupos de sulfato con carga negativa que mejoran su solubilidad en agua y reducen la permeabilidad de la membrana celular, permitiendo su uso para entrecruzamiento de proteínas extracelulares. SDAD y Sulfo-SDAD también tienen un enlace de disulfuro dentro del espaciador que puede ser cortado con agentes reductores.

• Variedades de brazo espaciador corto (3,9Å) y largo (12,5Å)
• Variedades permeables a membrana (NHS) e impermeables (Sulfo-NHS)
• Variedades no divisibles y divisibles (espaciador de disulfuro)

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