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TaqMan™ Cells-to-CT™ Control Kit
TaqMan&trade; Cells-to-C<sub>T</sub>&trade; Control Kit
Invitrogen™

TaqMan™ Cells-to-CT™ Control Kit

El kit de control Cells-to-CT TaqMan™ Ambion™ está diseñado para utilizarse con el kit de expresión génica Cells-to-CT TaqMan™. ElMás información
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Número de catálogoCantidad
4386995100 reactions
Número de catálogo 4386995
Precio (MXN)
-
Cantidad:
100 reactions
El kit de control Cells-to-CT TaqMan™ Ambion™ está diseñado para utilizarse con el kit de expresión génica Cells-to-CT TaqMan™. El kit de control incluye un control XenoRNA™, una transcripción de ARN sintético con una secuencia única que carece de homología a las secuencias biológicas anotadas actuales, lo que lo convierte en un control ideal para cualquier experimento. El kit de control también incluye Un ensayo de expresión génica TaqMan™ para el objetivo de control de XenoRNA™ y un ensayo de expresión génica TaqMan™ para el gen de control endógeno -actinaβ altamente expresado.

Características del kit de control de Cells-to-CT de Ambion™ TaqMan™:
• Confirma una entrada celular suficiente
• Supervisa la presencia de inhibidores de RT o PCR en tiempo real
• Controla la normalización de la muestra

Supervisa la inhibición y confirma una entrada celular suficiente
el kit de control Cells-to-CT™ TaqMan™ se utiliza para evaluar la inhibición y la entrada celular en las reacciones Cells-to-CT. Por ejemplo, el control XenoRNA™ confirma que las muestras pueden soportar RT-PCR y es un indicador de inhibidores de reacción. Al añadir el control de XenoRNA™ a la solución de parada durante el último paso del procedimiento de lisis celular, cada muestra se suministra con una cantidad constante de objetivo de control y posteriormente se amplifica mediante el ensayo de expresión génica TaqMan™ XenoRNA™.

La amplificación con el ensayo de expresión génica β-actina funciona como un control endógeno para la normalización, y asegura que la reacción de lisis contenga un número suficiente de células: esto es importante para experimentos con menos de ∼100 células y monitorea la eficacia de la lisis celular.

Evalúe la compatibilidad con nuevas líneas celulares
El kit de control Cells-to-CT™ TaqMan™ es ideal para evaluar la compatibilidad de líneas celulares no probadas con el kit de expresión génica Cells-to-CT TaqMan™ para determinar el número máximo de células que se pueden utilizar por reacción de lisis.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Molde controlControl de XenoRNA™ (transcripción de ARN sintético)
FormatoTubo
Símbolo de genACTB
Modificación de sonda internaMGB (Minor Groove Binder) (3'), Quencher no fluorescente (3'), FAM (5')
N.º de reacciones100 reacciones
Línea de productosAmbion, Cells-to-CT, TaqMan
Tipo de productoKit de control Cells-to-CT
Cantidad100 reactions
Condiciones de envíoHielo seco
Suficiente para100 reacciones
ObjetivoControl XenoRNA™, β-actina
Método de detecciónSonda de cebado
Para utilizar con (aplicación)Expresión génica
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Etiqueta o tinteFAM
Método de PCRqPCR
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El control de Xeno™ RNA, el control de ensayo de expresión génica Xeno™ RNA 20X TaqMan™, y el ensayo de expresión génica ACTB (β-actina) TaqMan™ 20X se almacenan a -20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

I'm seeing PCR products in the minus-RT control after performing my Cells-to-CT experiment. What does this mean?

If PCR products are seen in the minus-RT control reaction, but not in the no-template control, it indicates that genomic DNA remains in the sample and that genomic DNA was amplified in real-time PCR. Please follow the suggestions below:

- Ensure the DNase I is mixed thoroughly into the Lysis Solution.
- Use fewer cells per lysis reaction.
- Lyse cells using Lysis Solution that is at room temperature, and make sure that the lysis reaction occurs at room temperature.
You can also try increasing the incubation time of the lysis reaction to 8 minutes and/or using Lysis Solution that has been warmed up to 25 degrees C for cell lysis.

I'm getting PCR products in the no-template PCR control when performing a Cells-to-CT experiment. What could cause this?

PCR products in the no-template PCR control indicate that the sample is contaminated with DNA. More stringent steps need to be taken to control contamination.

I'm getting no PCR product or unexpected PCR products after performing a Cells-to-CT experiment. What could be the cause of this?

Please review the following possibilities and suggestions:

- A problem with adding or mixing the Stop Solution: ensure that the Stop Solution was added directly to the lysate, as components of the Lysis Solution may inhibit RT-PCR if not fully inactivated.
- The RNA was degraded: keep cells in PBS on ice before starting the cell lysis procedure.
- RNase in the sample was not completely inactivated: Too many cells could have been used or too much PBS left on the cells, diluting the lysis solution.
- The lysates sat too long before going to room temperature: Do not allow lysates to sit longer than 20 minutes at room temperature once the Stop Solution has been added.
- The sample does not contain the target RNA: Verify that the procedure is working by using the XenoRNA Control in the sample. Also check that your PCR primers can amplify your target under the PCR conditions you are using.

I ran out of stop solution for my Cells-to-CT experiment. Can I purchase it separately?

Yes, it is available in 1 mL aliquots (Cat. No. 4402960).

I have genomic DNA contamination in my Cells-to-CT reaction. How do I get rid of it?

1. Ensure that all medium is removed from the wells.
2. Wash with an equal volume of room temperature 1X PBS after the medium is removed.
3. Ensure that the reaction happens at room temperature (the lysis reaction may not reach room temperature if the plate is on ice, if the plate was quickly moved to the bench, or if a cold lysis solution was added).
4. Warm lysis solution to room temperature before adding to cells.
5. Allow the lysis reaction to proceed for 8 minutes at 25 degrees C.

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