MeltDoctor™ HRM Reagent Kit
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Applied Biosystems™

MeltDoctor™ HRM Reagent Kit

El kit de reactivos de HRM MeltDoctor™ de Applied Biosystems™ proporciona componentes de PCR envasados individualmente y el colorante deMás información
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Número de catálogoCantidad
44255571 kit
Número de catálogo 4425557
Precio (MXN)
-
Cantidad:
1 kit
El kit de reactivos de HRM MeltDoctor™ de Applied Biosystems™ proporciona componentes de PCR envasados individualmente y el colorante de HRM MeltDoctor™ necesario para el análisis mediante fusión de alta resolución.El análisis mediante fusión de alta resolución (HRM) es un método de análisis post-PCR (reacción en cadena de la polimerasa) utilizado para identificar la variación genética en las secuencias de ácido nucleico.
Este kit incluye:
• La ADN polimerasa AmpliTaq Gold™ 360 que, cuando se combina con el tampón AmpliTaq Gold™ 360 y el potenciador GC 360, amplifica una amplia gama de contextos de secuencia de ADN.La ADN polimerasa Gold™ AmpliTaq 360 ofrece una cobertura de 360° para una gama completa de objetivos.
•Mezcla GeneAmp™ dNTP
• Colorante de HRM MeltDoctor™, una forma estabilizada del tinte de ácido nucleico bicatenario fluorescente SYTO™ 9 desarrollado por Molecular Probes
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Para utilizar con (equipo)Sistema 7500 Fast, sistema HT 7900 Fast
Objetivo de genotipadoSNP (desconocidos o numerosos), objetivos epigenéticos
PolimerasaADN polimerasa AmpliTaq Gold 360
Línea de productosMeltDoctor
Tipo de productoKit de reactivos de Hrm
Cantidad1 kit
Tipo de muestraADN (genómico), ADNc
TécnicaAnálisis de HRM (fusión de alta resolución), barrido de mutaciones
Método de detecciónHRM
Para utilizar con (aplicación)PCR en tiempo real (PCRq)
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Etiqueta o tinteColorante de HRM (fusión de alta resolución), SYTO 9
Método de PCRqPCR
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Este kit incluye: Polimerasa de ADN AmpliTaq Gold™ 360 (2 x 50 µl, cada una a 5 U/µl), tampón AmpliTaq Gold™ 360, potenciador GC 360, mezcla de dNTPs GeneAmp™ y colorante MeltDoctor™ HRM (20x). El kit proporciona suficientes materiales para 250 reacciones de 20 µl cuando se utilizan 2 U de AmpliTaq Gold 360 DNA Polymerase por reacción.

Almacenar de -15° a -25°

LLa vida útil mínima garantizada es de 60 días (fecha de caducidad exacta impresa en el producto y en el certificado de análisis).

Preguntas frecuentes

How long should the amplicon be for HRM analysis?

We recommend to use 50-250 bp long PCR amplicons. Typically, shorter amplicons can distinguish the genotypes for a SNP better, especially for Type III and Type IV SNPs. This is simply because a single base variation affects the melting behavior of a 100 bp amplicon stronger than of a 500 bp amplicon, for example. In longer fragments, the risk of covering multiple mutations is also increased.

What can be used as positive control reactions in HRM analysis?

Positive control reactions should contain template DNA with a known sequence. In SNP genotyping experiments, this could be a sample with a known genotype. Positive control(s) for all genotypes should be included where possible to serve as a reference in melting curve comparison and assigning genotypes for test samples. In mutation scanning experiments, a sample with a wild type sequence could serve as a positive control. The controls should preferably have the same DNA concentration as their corresponding test samples. Control DNA should also be eluted and/or diluted in the same buffer as the samples.

In HRM analysis, when is it better to use a 3-step cycling protocol rather than a 2-step protocol?

A 3-step cycling protocol is recommended for the analysis of complicated (especially Type IV SNP) targets, amplicons longer than 200 bp, and amplicons with a primer annealing temperature that is less than 60 degrees C.

The HRM software will not accept my calibration file. What is wrong?

Check that there are no outliers on the plate. You cannot omit any wells on the HRM calibration plate.

I have a 7900HT Fast Real-Time PCR System, and cannot open the data file in HRM software. What could be causing this?

There are a few possibilities. First, make sure the HRM Software version is v2.0.1, and the 7900HT Fast Real-Time PCR System software version is v2.3 or above. Second, check that the run method used was as recommended in the HRM protocol; make sure the ramp rate for the dissociation stage is 1%. Then try to open the calibration file from the HRM Software; if it does not open, the calibration file is defective. The defects could be due to a bad calibration plate or instrument uniformity issue.