AmpFLSTR™ NGM SElect™ PCR Amplification Kit

El kit NGM SElect es un kit multiplex de amplificación única y altamente robusto de repetición en tándem corta (STR) desarrollado para laboratorios de identificación humana que deseen utilizar el conjunto estándar europeo ampliado de Loci junto con el locus SE33 altamente polimórfico. El kit NGM SElect combina los últimos avances en síntesis de cebadores, mejora de tampones y optimización de ciclos térmicos. Esto permite al kit ofrecer una alta sensibilidad y un rendimiento STR mejorado para las pruebas de casos forenses y las muestras de bases de datos en un flujo de trabajo sencillo.

Características principales del kit NGM SElect:

• La excepcional calidad de los datos y las capacidades de discriminación admiten el uso compartido internacional de los datos
• Permite mejorar significativamente el rendimiento de las muestras inhibidas y degradadas
• Permite una mayor sensibilidad
• Maximiza la concordancia con las muestras previamente escritas
• Facilita la interpretación fiable, promueve un flujo de trabajo optimizado y agiliza el proceso de implementación

Calidad de datos que merece la pena compartir
El kit NGM SElect se ha diseñado para ofrecer un potente nivel de discriminación y calidad de datos para respaldar iniciativas de intercambio de datos transfronterizo. El kit se ocupa de los requisitos estipulados por la Red Europea de Institutos de Ciencias Forenses (ENFSI) y el Grupo Europeo de Elaboración de perfiles de ADN (EDNAP), e incluye el conjunto de normas europeas ampliadas de Loci (ESSL).

El kit NGM SElect amplifica simultáneamente los mismos 16 loci incluidos en el kit NGM (D3S1358, vWA, D16S539, D2S1338, D8S1179, D21S11, D18S51, D19S433, TH01, FGA, Amelogenina, D10S1248, D22S1045, D2S441, D1S1656 y D12S391) con la adición del locus SE33 altamente polimórfico en el canal de colorante PET (rojo) (figura 1).

Configurado para el éxito
Utilizando nuestra experiencia en tecnología de cinco colorantes y modificadores de movilidad, 17 loci se alojan en una sola amplificación mientras se mantiene un espaciado óptimo (figura 2). Esto permite la designación de alelos inequívocos. Todos los amplicones se encuentran por debajo de 450 pares de bases (bp) para maximizar el rendimiento en una amplia gama de muestras forenses. La mayoría de los loci se concentran por debajo de 200 bp, lo que permite la recuperación de un mayor número de alelos a partir de muestras degradadas complejas.

Potente discriminación
La combinación de loci en el kit NGM SElect genera el máximo poder de discriminación de cualquier kit AmpFLSTR (tabla 1). Esto ayuda a minimizar las coincidencias extrañas al comparar conjuntos de datos grandes (por ejemplo, para el intercambio de datos transfronterizo). El kit NGM SElect también ofrece una utilidad para otras aplicaciones que requieren mayores niveles de discriminación, entre las que se incluyen:
• Análisis de parentesco complejo
• Identificación de víctimas de desastres
• Investigaciones de personas desaparecidas

Permite un rendimiento significativamente mejorado en muestras inhibidas y degradadas
Aprovechando los recientes avances en la tecnología de amplificación de PCR pionera con el kit NGM, el kit de NGM SElect permite la recuperación de datos de muestras gravemente inhibidas y degradadas. Por ejemplo, el kit NGM SElect es capaz de extraer perfiles completos incluso de muestras que contienen altas concentraciones de inhibidores de PCR como el ácido húmico (figura 3).

Funciona con mayor sensibilidad
El kit NGM SElect se beneficia de las mismas mejoras de sensibilidad que el kit NGM, lo que se traduce en una recuperación superior de alelos a niveles de entrada más bajos (figura 4). Esto también puede mejorar la detección del menor contribuyente en una muestra mixta. El protocolo de entrada de ADN estándar de 29 ciclos y 1 ng permite el máximo equilibrio de perfiles y también está disponible un protocolo de 30 ciclos validado. El número de ciclo más alto conduce a un aumento correspondiente de la señal, lo que aumenta la posibilidad de detección de alelos a partir de cantidades de ADN de entrada más bajas. El uso de 30 ciclos también se traduce en datos offscale en una entrada de 1 ng (figura 4); por lo tanto, los laboratorios que deseen adoptar este protocolo deben determinar el ADN de entrada óptimo apropiado para su flujo de trabajo mediante estudios de validación interna.

Maximiza la concordancia
El kit NGM SElect mantiene secuencias de cebador idénticas para los loci STR principales comunes a los kits SGM Plus, Identifiler y SEfiler Plus, por lo que:
• Maximización de la concordancia con los conjuntos de datos existentes para comparaciones históricas simplificadas
• Minimización de los requisitos para los análisis repetidos necesarios para resolver eventos no concordantes
• Mantenimiento de un grado suficiente de similitud de configuración con kits anteriores para reducir los requisitos de formación e implementación

Los cebadores para el locus SE33 se han rediseñado a partir de los utilizados en el kit SEfiler Plus con objeto de reubicar el amplicón dentro del multiplexado. Sin embargo, las nuevas secuencias de cebadores se han optimizado y probado a fondo para mantener la concordancia con el kit SEfiler Plus lo máximo posible.

Facilita la interpretación de datos fiables
El kit NGM SElect se beneficia de las mejoras en las técnicas de síntesis de cebadores, lo que se traduce en unos niveles iniciales significativamente más limpios que los kits AmpFLSTR anteriores (figura 5). La falta de artefactos relacionados con el colorante, incluso en 30 ciclos, mejora la capacidad del analista para interpretar los datos, especialmente en el caso de muestras de bajo nivel. Otras mejoras en la calidad del perfil mejoran todavía más la interpretación fiable de datos, entre las que se incluyen:
• Sensibilidad y solidez mejoradas
• Equilibrio heterocigoto maximizado e intracolor
• Utilización óptima del conjunto de colorantes

Estas características también ayudan a optimizar el procesamiento de muestras de una sola fuente mediante un software del sistema especializado, como GeneMapper ID-X.

Fácil de implementar, fácil de usar
Cada aspecto del kit NGM SElect se ha diseñado teniendo en cuenta la facilidad de implementación y uso. Se trata de una solución de kit único que ofrece resultados de alta calidad tanto para muestras de bases de datos como de pruebas de casos, lo que optimiza el flujo de trabajo de ADN forense a la vez que reduce los costes operativos.

El flujo de trabajo del kit es muy similar al de otros kits AmpFLSTR, lo que permite a los laboratorios forenses optimizar la validación y la implementación. Sin embargo, la enzima ahora se encuentra en la mezcla maestra, lo que simplifica la configuración de la reacción. Los tiempos de ciclado se han acortado aproximadamente una hora, lo que permite a los laboratorios obtener resultados de mayor calidad más rápidamente. Para la compatibilidad con sistemas manuales y automatizados, hay disponibles dos tamaños de paquete, el kit estándar de 200 reacciones y un kit más grande de 1000 reacciones. El paquete más grande incluye frascos más grandes para facilitar su uso en plataformas de manipulación de líquidos.

Nota: Solo para uso forense o de paternidad.

Aviso importante

La compra de este producto transmite al comprador la licencia no transferible para utilizar la cantidad comprada del producto solo en pruebas forenses o de paternidad realizadas por él mismo. Esta licencia no incluye, en virtud de lo establecido por un tribunal de los Estados Unidos, ninguna licencia para utilizar este producto en la determinación o el análisis del quimerismo, la clasificación de muestras molares, la autenticación de las líneas de células, la determinación del sexo fetal, el análisis de cáncer, la investigación genética, las aplicaciones forenses no relacionadas con el trabajo sobre casos (como la investigación general en la ciencia forense o bien la formación y capacitación a desempleados en un laboratorio forense), la identificación o la determinación de la contaminación en células maternas o seguimiento de muestras. Pueden obtenerse derechos adicionales contactando con Promega Corp., 2800 Woods Hollow Rd., Madison, WI 53711 (EE. UU.).

Para conocer las licencias y restricciones de uso limitado, visite thermofisher.com/HIDlicensing.