Pierce™ IgM Purification Kit

El kit de purificación de IgM Thermo Scientific Pierce es un sistema de tampón y matriz de afinidad fácil de usar para la purificación de IgM a partir de líquido ascítico de ratón. El método utiliza la proteína de unión a manosa inmovilizada, que se une con la IgM en los tampones suministrados con el kit.

La MBP-agarosa Pierce es una proteína de unión a manosa (también llamada «lectina de unión a manosa», MBL) purificada inmovilizada en agarosa granulada al 4 %. Cuando se utiliza con un sistema de tampón optimizado basado en una unión dependiente de calcio y de temperatura, esta resina permite la purificación por afinidad específica de IgM de ratón a partir de líquido ascítico y otras muestras concentradas. La resina y los tampones fundamentales están disponibles individualmente o reunidos en un completo kit de purificación de IgM que contiene una columna de 5 ml preempaquetada de MBP-agarosa.

Características del kit de purificación de IgM:

• MBP inmovilizado: el sistema de afinidad basado en proteína de unión a manosa (MBP) permite la purificación específica de IgM de ratón a partir de líquido ascítico o el aislamiento parcial de IgM de humano a partir de suero.
• Kit completo: el kit de purificación de IgM incluye una columna de MBP preempaquetada y tampones listos para usar para una purificación cómoda de al menos 1,5 mg de IgM a partir de muestras de ascitis de 0,5 ml por uso de columna.
• Condiciones leves: las condiciones de tampón casi neutras y no desnaturalizadoras garantizan la recuperación de los anticuerpos funcionales.
• Reutilizable: el ligando estable reutilizable y las resinas pueden regenerarse y reutilizarse al menos 10 veces sin una disminución significativa de la capacidad de unión

La proteína de unión a manosa (MBP), también conocida como «lectina de unión a la manosa» (MBL), es una lectina de mamíferos que se produce en el hígado y aparece en el suero. La MBP consta de 18 subunidades idénticas, cada una de ellas con una masa molecular de aproximadamente 31 kDa. La proteína es capaz de iniciar la activación del complemento mediada por hidratos de carbono.

El protocolo del kit de purificación de IgM basado en MBP inmovilizado es más eficaz para purificar IgM de ratón a partir de líquido ascítico, aunque también permite la purificación parcial de IgM de humano a partir de suero. Los pasos de unión y elución dependen del calcio y de la temperatura. Los pasos de unión y lavado se llevan a cabo a 4 °C en un tampón Tris que contiene 20 mM de cloruro cálcico. La elución se logra a temperatura ambiente en un tampón Tris que contiene EDTA, pero no cloruro cálcico. Este sencillo protocolo es de fácil uso y produce IgM de ratón con un 90 % de pureza a partir de líquido ascítico. La MBP inmovilizada se puede regenerar al menos 10 veces sin que ello suponga una pérdida aparente de su capacidad de unión. La IgM de humano también se une al soporte, aunque con una capacidad ligeramente inferior y cierta copurificación de IgG. El sistema de purificación no ha sido probado ni validado para su uso con otras especies y fuentes de muestras.

Productos relacionados
Proteína de unión manosa-agarosa Pierce™
Tampón de preparación de columnas MBP para el kit de purificación de IgM Pierce™
Tampón de elución para el kit de purificación de IgM Pierce™