MAGnify™ Chromatin Immunoprecipitation System

El sistema de inmunoprecipitación de cromatina MAGnify™ proporciona un ensayo sencillo y optimizado para el enriquecimiento de complejos de proteínas/cromatina y la recuperación de ADN mediante tecnología de captura con gránulos magnéticos. El ADN aislado está listo para su posterior análisis mediante métodos como ensayos basados en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR), o bien mediante secuenciación masiva de ADN en paralelo.

ChIP
La inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) es una potente técnica para estudiar la asociación de ciertas proteínas con regiones específicas del genoma. Se cree que estas proteínas de unión a secuencias específicas de ADN desempeñan un papel importante en procesos celulares como la replicación, recombinación, reparación y segregación de ADN; la estabilidad cromosómica; la progresión del ciclo celular; y el silenciamiento epigenético. En un ensayo de ChIP estándar, se fija una célula mediante un tratamiento de formaldehído, se cizalla la cromatina y se inmunoprecipita mediante un anticuerpo altamente específico. A continuación, el investigador analiza el ADN para identificar las regiones genómicas donde las proteínas asociadas a la cromatina se unen a la cromatina in vivo. Este kit permite a los investigadores comenzar con cantidades de muestras inferiores a las utilizadas en los flujos de trabajo de ChIP tradicionales, lo que permite conservar muestras valiosas; además, el protocolo se puede completar en un solo día, en comparación con el periodo de 2–3 días de un ensayo de ChIP tradicional. El kit se puede usar con nuestro paquete de anticuerpos validados para ChIP y también como complemento de los productos MethylCode™ y NCode™ en investigaciones epigenéticas posteriores.

Uso del sistema MAGnify™
Cuando se utiliza el sistema MAGnify™, se tratan las células o el tejido con formaldehído para generar entrecruzados proteína-proteína y proteína-ADN entre moléculas muy próximas al complejo de cromatina. A continuación se lisan las células, se libera la cromatina de los núcleos y se cizalla mediante ultrasonidos para reducir el tamaño de fragmento medio de ADN a un intervalo de 200–500 bp para el análisis mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR), o de 100–300 bp para el análisis mediante secuenciación masiva de ADN en paralelo. A continuación, se inmunoprecipita y aísla la proteína de interés entrecruzada mediante un anticuerpo cualificado para ChIP específico conjugado en Dynabeads™ Protein A/G. El entrecruzamiento de formaldehído se invierte mediante tratamiento térmico y se purifica el ADN asociado con esa proteína. Ahora el ADN está listo para análisis posteriores, como PCR de punto final o PCR cuantitativa (qPCR), análisis de genoma completo mediante el uso de promotor/microchips de embaldosado o secuenciación de próxima generación. En el análisis de PCR/qPCR, los primers se han diseñado para abarcar la secuencia de ADN deseada y los datos demuestran si la proteína específica de interés se asocia in vivo con esa región del ADN.