Imject™ EDC mcKLH Spin Kit

El kit de centrifugación de EDC mcKLH Thermo Scientific Imject contiene paquetes de proteínas portadoras purificadas de hemocianina de lapa californiana que permiten la preparación sencilla de inmunógenos muy eficaces con antígenos peptídicos. Este kit incluye unidades listas para su uso de la proteína portadora KLH, tampones optimizados de reacción y columnas de centrifugación y desalado sin complicaciones para la preparación de inmunógenos con el método del EDC.

La KLH es la proteína portadora más conocida e inmunogénica que se utiliza para la preparación de antígenos peptídicos para la inmunización y la producción de anticuerpos. Las preparaciones de KLH en tampón de fosfato están listas para la conjugación hapteno-proteína portadora mediante entrecruzamiento con éster de NHS reactivo con grupos amino o entrecruzamiento con glutaraldehído. Las preparaciones en tampón MES están optimizadas para la conjugación péptido-proteína portadora mediante el entrecruzador carbodiimida reactiva con grupos carboxilo denominada EDC (o EDAC).

Características del kit con KLH de maricultura Imject:

• Kit práctico: contiene la mcKLH liofilizada (en tampón MES), el entrecruzador EDC y componentes accesorios para preparar de forma sencilla inmunógenos para inyección listos para su uso.
• Conjugación de alto rendimiento: cada molécula de KLH contiene cientos de aminas primarias disponibles para unir haptenos mediante entrecruzadores EDC o éster de NHS.
• Calidad validada: la KLH de maricultura, purificada y estabilizada, mantiene la solubilidad en soluciones acuosas, a diferencia de las fuentes tradicionales de la proteína portadora.
• Origen sostenible: la KLH se recolecta de colonias seleccionadas del molusco Megathura crenulata (lapa californiana) cultivadas mediante maricultura, no se extrae de colonias salvajes.
• Altamente inmunogénica: la KLH tiene una elevada masa molecular (de 4,5 x 10⁵ a 1,3 x 10⁷ daltons; agregados de subunidades de 350 y 390 kDa) y provoca una respuesta inmunitaria más fuerte que la BSA o la ovoalbúmina.

Las proteínas portadoras son moléculas grandes y complejas capaces de estimular una respuesta inmunitaria tras su inyección. La producción satisfactoria de anticuerpos específicos frente a antígenos pequeños (es decir, péptidos o compuestos farmacológicos) requiere que estos haptenos se conjuguen covalentemente con una molécula más grande y más compleja (normalmente una proteína) para hacerlos inmunogénicos. Las proteínas portadoras se seleccionan en función de su inmunogenicidad, su solubilidad y de si se puede lograr una conjugación adecuada con la proteína portadora.

La hemocianina de lapa californiana (KLH) es ampliamente utilizada como proteína portadora para la conjugación con haptenos y otros antígenos a fin de hacerlos más inmunogénicos para la producción de anticuerpos. Debido a su gran masa y complejidad, la KLH provoca una respuesta inmunitaria más fuerte que otras proteínas portadoras. Puesto que la proteína procede de un molusco, está filogenéticamente alejada de los mamíferos y, por tanto, existen menos posibilidades de que se produzcan anticuerpos que reaccionen de forma cruzada con las muestras diana que suelen emplearse en los ensayos.

La KLH de maricultura Imject (mcKLH) se recolecta de lapas cultivadas en maricultura, no del medio natural. La mcKLH Imject proporciona la mayor inmunogenicidad posible; se purifica y liofiliza en tampones que optimizan su estabilidad y solubilidad para la conjugación con haptenos. Al ser una proteína grande, la KLH tiene cientos de grupos amino primarios y carboxilo que se pueden usar como diana para la conjugación con éster de NHS y otros reactivos de entrecruzamiento.

El entrecruzador carbodiimida EDC conjuga haptenos que contienen grupos carboxilo (por ejemplo, el extremo C de los antígenos peptídicos) con la proteína portadora KLH, altamente inmunogénica, para la inmunización y la producción de anticuerpos. Este método de preparación de inmunógenos es idóneo para antígenos peptídicos con pocos o ningún resto de ácido aspártico y glutámico (carboxilatos) y de restos de lisina (aminas primarias) en la parte central de la secuencia primaria. Dado que los péptidos contienen tanto carboxilatos como aminas, la conjugación mediante EDC tiene como resultado su polimerización en distinto grado y una orientación aleatoria en su adhesión a la proteína portadora. Normalmente, esto da lugar a un alto nivel de carga antigénica en la proteína portadora, así como la presentación en todas las orientaciones posibles para la producción de anticuerpos. No obstante, los epítopos importantes (los que se desea detectar) de la secuencia peptídica del antígeno pueden bloquearse mediante la conjugación mediada por EDC si esas regiones contienen aminas primarias (restos de lisina) o carboxilatos (restos de ácido aspártico y glutámico). En estos casos, use un reticulador homobifuncional reactivo a la amina con el mcKLH purificado en tampón fosfato o sintetice el péptido con una cisteína terminal única y use un kit con mcKLH activado con malemida para preparar el conjugado de proteína portadora.

Más datos del producto
• Datos de activación y conjugación de proteínas del portador para la preparación de inmunógenos

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