Gel reductor de disulfuro de TCEP inmovilizado Pierce™

El gel reductor de disulfuro de TCEP inmovilizado elimina la necesidad de utilizar laboriosos e ineficientes métodos de filtración en gel para separar la muestra reducida del agente reductor. El gel reductor de disulfuro de TCEP inmovilizado puede adaptarse convenientemente a una variedad de tamaños y formatos (es decir, procedimientos de lotes, columnas de centrifugación y columnas de flujo por gravedad). Este gel reductor sirve para aplicaciones de un solo uso; no se puede regenerar ni reutilizar.

Características del gel reductor de disulfuro de TCEP inmovilizado:

• Inodoro: reduzca las proteínas en su sobremesa; contribuye a un entorno de laboratorio más saludable
• Estable: no hay prácticamente pérdida de actividad cuando se almacena refrigerado
• Versátil: reduce los péptidos y las proteínas en una amplia gama de condiciones de pH, sal, detergente y temperatura
• Flexible: la pulpa de resina proporciona flexibilidad para su uso en los modos de tubo de centrifugación, columna o lote
• Ahorro de tiempo: la eliminación de un reductor soluble ahorra tiempo y conserva la muestra
• Eficaz: escinde tanto los enlaces de disulfuro naturales como los enlaces de disulfuro incorporados artificialmente mediante entrecruzamiento

Ventajas frente a los agentes reductores de disulfuro soluble:
• Excelente recuperación sin agentes reductores: la eliminación del agente reductor y la recuperación de la molécula reducida sin pérdida de muestra es un problema inherente al DTT o al β-mercaptoetanol (BME). El TCEP inmovilizado le permite recuperar una gran producción de proteínas o péptidos reducidos (85 % o más) sin necesidad de dializar o desalar.
• Inodoro: a diferencia de DTT o BME, el TCEP inmovilizado no tiene olor, por lo que las reducciones se pueden llevar a cabo en la mesa de trabajo y son más prácticas.
• Estable en el aire: la estabilidad inherente del TCEP elimina cualquier necesidad de precauciones especiales para evitar la oxidación al manipular, usar o almacenar el gel reductor de disulfuro de TCEP inmovilizado.
• Fácil manejo: reductor TCEP inmovilizado que le permite dispensar fácilmente la cantidad de soporte necesaria para cada aplicación. Las reducciones se pueden realizar en un amplio intervalo de valores de pH (pH 4 a 9) y temperaturas (5 a 95 °C).

Las trialquilfosfinas sirven como excelentes agentes para reducir puentes disulfuro en proteínas, péptidos y otras moléculas que contienen puentes disulfuro [1,2] y son relativamente poco reactivas a otros grupos funcionales. [3] La trialquilfosfina TCEP es estable en soluciones acuosas y no experimenta una rápida oxidación como a menudo ocurre con otros agentes reductores como el ditiotreitol (DTT) y el β-mercaptoetanol (BME). [4] La TCEP no interfiere con los reactivos que son reactivos al sulfhidrilo habituales (por ejemplo, entrecruzadores de maleimida). [5] Sin embargo, muchos protocolos requieren la recuperación de la muestra reducida separada del agente reductor. El gel reductor de disulfuro de TCEP inmovilizado permite la reducción de la muestra y la recuperación inmediata de la muestra reducida sin agente reductor.

Consideraciones para el uso del gel reductor de disulfuro de TCEP inmovilizado:
• Se produce una reducción en un amplio intervalo de pH (pH 4,0 a 9,0) y de temperatura (de 5 a 95 °C).
• La mayoría de las proteínas se reducen de manera eficiente sin un desnaturalizante. Sin embargo, la adición de un desnaturalizante como la guanidina·HCl puede ayudar a exponer disulfuros internos al TCEP inmovilizado.
• No se recomienda utilizar urea como desnaturalizante, ya que forma cianatos que reaccionan a grupos de sulfhidrilos
• No permita que haya metales en contacto con el TCEP inmovilizado, ya que esto reduciría su actividad.
• Si se incluyen 5—20 mM de EDTA en el tampón de muestra durante la reducción, ayuda a prevenir la reoxidación de los grupos de sulfhidrilos por metales divalentes, como Zn 2+, Cu 2+ y Mg 2+.
• La muestra reducida debe usarse inmediatamente después de la reducción, ya que los disulfidos se reformarán con el tiempo.

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