Uracilo-ADN glicosilasa, termolábil

Uracil-DNA Glycosylase excinde el uracilo del ADN que contiene dU mediante la división del enlace N-glicosílico entre la base de uracilo y la columna vertebral del azúcar. Esta escisión genera sitios apirimidínicos sensibles a los álcalis que se bloquean de la replicación por la ADN polimerasa o se impide que se convierta en un sitio de hibridación.

El ADN con dU monocatenario y bicatenario es un sustrato para la glicosilasa de ADN del uracilo, mientras que el ARN y el ADN que contiene dT no lo es.

Uracil-DNA Glycosylase también puede usarse para aumentar la eficacia de clonación de productos de PCR que tengan incorporados cebadores que contienen dU, así como para aumentar la eficacia de la mutagénesis dirigida al sitio.

La la glicosilasa de ADN del uracilo derivada de Gadus morhua tiene todos los atributos de la enzima derivada de E. coli con el beneficio añadido de ser calor-lábil. Se inactiva de forma completa e irreversible después de 10 minutos de incubación a 50 °C.

Pureza:
La enzima se purifica cromatográficamente y se prueba para endonucleasas y exonucleasas contaminantes.

Tampón de almacenamiento:
50 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM de NaCl, 0,5 mM de EDTA, 1 mM de DTT, 0,1 % de Triton X-100, 50 % de glicerol.

Condiciones del ensayo:
La mezcla de reacción contiene 70 mM de Tris-HCl, pH 8,0, 10 mM de NaCl, 1 mM de EDTA, 100 µg/ml de BSA, ADN marcado con ³H-dUTP, y Uracil-DNA Glycosylase. Se incuba a 37 °C durante 1 hora.

Definición de la unidad:
Una unidad es la cantidad de enzima necesaria para liberar 1 nmol de uracilo del ADN que contiene dU en una hora a 37 °C.

Concentración:
1 unidad/µL

Aplicaciones:
  1.Estudio de la reparación del ADN y detección de mutaciones.
  2.Aumentar la eficacia de clonación de productos de PCR.
  3.Aumentar la eficiencia de la mutagénesis dirigida al sitio.
  4.Estudio de las interacciones proteína-ADN.

Fuente:
Recombinante de Gadus morhua (hígado de bacalao)