Limpieza de productos de PCR de alto rendimiento HT ExoSAP-IT™

La limpieza del producto de PCR de alta capacidad de procesamiento HT ExoSAP-IT l es una formulación alternativa del reactivo ExoSAP-IT especialmente diseñada para los requisitos exclusivos de las plataformas automatizadas de alto rendimiento y las pipetas multicanal. El reactivo HT ExoSAP-IT tiene una vida útil más larga a temperaturas más altas y una viscosidad reducida para el pipeteo robótico.

Al igual que el ExoSAP-IT para la limpieza de productos de PCR (PN 78200), el reactivo HT ExoSAP-IT es una mezcla de exonucleasa I y Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) que elimina los primers y dNTP excesivos tras una reacción de PCR en una sola incubación. El reactivo HT ExoSAP-IT posee una mayor estabilidad térmica y una menor viscosidad, ofreciendo una mayor facilidad de uso en formatos automatizados de 96 y 384 pocillos.

•Limpieza de PCR de un tubo: añada el reactivo HT ExoSAP-IT directamente al producto PCR
•Precisión excepcional: consiga datos de alta calidad incluso con longitudes de lectura largas
•10 % de recuperación de muestras: sin pérdida de productos de PCR independientemente del tamaño del fragmento
•Simple, de un solo paso: reemplaza los pasos múltiples y el tiempo perdido inherente con los gránulos o columnas
•Procesamiento de alto rendimiento: un tiempo aún más rápido para obtener resultados con una formulación de baja viscosidad, que permite el pipeteo robótico
•Elimina los primers y dNTP excesivos: no interfiere con las aplicaciones posteriores
  – Secuenciación
  – Análisis SNP
  – Extensión de base única
  –Análisis de fragmentos
  – Transcripción in vitro
•Escalable: tratar volúmenes de reacción de 5 microlitros a 5 l
•Envasado práctico: disponible en tiras de ocho tubos y 12 tiras en una placa de 96 pocillos
•Estable a +25 deg;C durante ocho horas: conserva la actividad funcional completa y a 45 °C es estable durante una semana

El reactivo HT ExoSAP-IT se añade directamente al producto PCR e incuba a 37 °C durante 15 minutos. Después del tratamiento de PCR, se inactiva simplemente calentándolo a 80 °C durante 15 minutos. Nuestra formulación de gran capacidad de procesamiento está diseñada para pipeteo robótico y pipetas multicanal. El reactivo HT ExoSAP-IT tiene una viscosidad inferior a la mezcla estándar y está disponible en formato de tira de ocho tubos para su facilidad de uso.

El reactivo HT ExoSAP-IT utiliza dos enzimas hidrolíticas, exonucleasa I y SAP, conjuntamente en un tampón especialmente formulado, para eliminar los dNTP y primers no deseados de los productos de PCR. La exonucleasa I elimina los primers monocatenarios residuales y cualquier ADN monocatenario extraño producido en la PCR. El SAP elimina los dNTP restantes de la mezcla de PCR.

Sencillo: de un solo paso
El reactivo HT ExoSAP-IT sólo necesita un paso de pipeteo y dos incubaciones. Sólo tiene que añadir el reactivo HT ExoSAP-IT al producto PCR y en un plazo de 30 minutos se pueden realizar secuenciaciones, análisis de SNP, extensión de base única o análisis de fragmentos. La eliminación enzimática de primers excesivos y nucleótidos no incorporados se produce en un paso sencillo mediante el uso del reactivo HT ExoSAP-IT en un solo tubo, en una tira de ocho tubos o en 12 tiras en una placa de PCR con poco faldón de 96 pocillos. Nuestro nuevo formato lo convierte en un producto ideal para utilizarlo junto con robots.

Precisión excepcional con HT ExoSAP-IT
Consiga datos de alta calidad y precisión en la secuenciación con HT ExoSAP-IT, incluso con largas longitudes de lectura. Las lecturas de secuencias de los productos de PCR tratados con HT ExoSAP-IT eran, de media, 50+ bases más largas que las muestras tratadas con productos de la competencia. Utilizando ADN genómico humano, se secuenció un fragmento de 1007 bp sin equivocaciones. Las limitaciones de tamaño asociadas con métodos de limpieza de PCR alternativos no son un factor de HT ExoSAP-IT. Los valores de Phred 20 en toda la longitud de una secuencia de 970 bp fueron 822 ± 9 con muestras tratadas con HT ExoSAP-IT y sólo 776 ± 83 con muestras tratadas con Agencourt™ AMPure™ XP.

Sin pérdida de muestras
El uso de HT ExoSAP-IT elimina todas las purificaciones de gel o columna, sedimentaciones, filtraciones, gránulos y/o separaciones magnéticas⁽¹⁾. Hay una recuperación del 100 % de productos de PCR largos y cortos con HT ExoSAP-IT.

El producto de PCR tratado con HT ExoSAP-IT es estable
El reactivo Ht ExoSAP-IT se ha probado rigurosamente y está sujeto a un estricto control de calidad. No se produjo degradación alguna después del almacenamiento del producto de PCR tratado con HT ExoSAP-IT durante una semana a 24 °C.

Referencias:
1. DUGAN, K. A., LAWRENCE, H. S., HARES, D. R., FISHER, C. L. AND BUDOWLE B. (2002) J. Forensic Sci 47, 811-818.
2. HANKE, M. AND WINK, M. (1994) BioTechniques 17, 858-860.
3. MU, J., DUAN, J., MAKOVA, K., JOY, D., HUYNH, C., BRANCH, O., LI, W. AND SU, X. (2002) Nature 418, 323-326.
4. SILVA, JR., W. A., COSTA, M. C. R., VALENTE, V., DE FREITAS SOUSA, J., PACÓ-LARSON, M. L., ESPREAFICO, E. M., CAMARGO, S. S., MONTEIRO, E., DE JESUS, A., HOLANDA, M. A., ZAGO, M. A., SIMPSON, A. J. G. AND NETO, E. D. (2001) BioTechniques 30, 537-542.
5. WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4354-4355.