Reactivos de extracción nuclear y citoplasmática NE-PER™

El kit de extracción nuclear y citoplasmática Thermo Scientific NE-PER permite realizar una lisis celular eficaz y extraer fracciones independientes de proteínas citoplasmáticas y nucleares en menos de dos horas.

Características del kit de extracción nuclear y citoplasmática NE-PER:

• Rápido: obtención de fracciones nucleares y citoplasmáticas de proteínas solubles en menos de dos horas
• Probado: se hace referencia al kit de reactivos NE-PER en más de 950 publicaciones distintas
• Versátil: proteína nuclear de células o tejido cultivados (destinados únicamente a muestras frescas).
• Ampliable: dos tamaños de kit para la producción de extractos de células y tejidos
• Práctico: instrucciones simples que no requieren ultracentrifugación por gradientes
• Compatible: uso en análisis posteriores, incluidos inmunotransferencia (Western blotting), ensayos con cambio de gel, ensayos de proteínas, ensayos con genes indicadores y ensayos de actividad enzimática

El kit NE-PER es un método de extracción de proteínas nucleares que implica una lisis simple y escalonada de las células, así como un aislamiento centrífugo de fracciones de proteínas citoplasmáticas y nucleares. Las únicas herramientas necesarias son pipetas, tubos y microcentrífugas de sobremesa. Los reactivos NE-PER solubilizan y separan de manera eficaz las proteínas citoplasmáticas y nucleares en fracciones con una reducción al mínimo de la contaminación cruzada o las interferencias de ARNm y ADN genómico. Una vez desaladas o diluidas, las proteínas aisladas pueden utilizarse para realizar inmunoensayos y experimentos de interacción de proteínas, tales como ensayos de cambio de movilidad (EMSA), coinmunoprecipitación (co-IP) y ensayos de precipitación.

Hay diversos métodos disponibles para aislar los núcleos y preparar los extractos de proteínas nucleares. La mayoría de los métodos para la preparación de extractos nucleares son procesos muy largos que requieren homogeneización mecánica, ciclos de congelación/descongelación, extensas etapas de centrifugación o diálisis que pueden comprometer la integridad de las proteínas nucleares. El kit de reactivos de extracción nuclear y citoplásmica NE-PER es un protocolo basado en reactivos que permite una lisis gradual de las células, la separación del citoplasma de los núcleos intactos y, a continuación, la extracción de proteínas nucleares de ARNm y ADN genómico. Este suave proceso tarda menos de dos horas y solo requiere una centrífuga de sobremesa estándar cuando se utilizan células cultivadas. Además, pueden recuperarse tanto proteínas nucleares activas como proteínas citoplasmáticas a partir de una misma muestra de tejido o cultivo celular.

A partir de dos millones de células, el kit produce normalmente de 200 a 500 µg de proteína citoplasmática, y de 100 a 200 µg de proteína nuclear (en una concentración de 1 mg/ml). La contaminación cruzada habitual entre las fracciones de citosol y las fracciones nucleares es de aproximadamente el 10 %. El método recupera principalmente proteínas solubles del núcleo, y no tanto proteínas unidas a la cromatina o proteínas de membrana integral de la envoltura nuclear. La concentración de proteínas de los extractos nucleares se puede manipular fácilmente mediante la variación del volumen del reactivo de extracción nuclear (NER) utilizado para la extracción sin ninguna pérdida significativa en la eficacia de la extracción. La extracción específica de proteínas nucleares a partir de células es fundamental para el éxito de numerosos estudios de regulación de la expresión génica. Si bien existen diversos métodos para aislar los núcleos y preparar los extractos de proteínas nucleares, la mayoría son procesos muy largos que requieren una homogeneización mecánica, ciclos de congelación/descongelación, extensas etapas de centrifugación o diálisis que pueden comprometer la integridad de muchas proteínas nucleares frágiles. El kit NE-PER soluciona estos problemas y ofrece extractos concentrados de alta calidad de proteínas nucleares para su uso en EMSA y otras técnicas de análisis.

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