Apo-BrdU Apoptosis Detection Kit

El kit APO-BRDU™ es un método de coloración de dos colores que permite marcar las roturas del ADN y del ADN total celular para detectar células apoptóticas mediante citometría de flujo. El kit contiene las instrucciones y los reactivos necesarios para la medición de la apoptosis celular, es decir: células de control positivas y negativas para evaluar el rendimiento del reactivo; tampones de lavado, de reacción y de enjuague para procesar pasos individuales del ensayo; enzima desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT); bromodesoxiuridina trifosfato (Br-dUTP); anticuerpos anti BrdU marcados con fluoresceína para marcar las roturas de ADN y solución de yoduro de propidio/ARNasa A para la contratinción del ADN total.

Una de las características más fácilmente mensurables de las células apoptóticas es la ruptura del ADN genómico por las nucleasas celulares. Estos fragmentos de ADN se pueden extraer de células apoptóticas y producir la aparición de escaleras de ADN cuando se analiza por electroforesis en gel de agarosa. El ADN de células no apoptóticas, que permanece prácticamente intacto, no muestra este patrón de escalera en electroforesis en geles de agarosa. El gran número de fragmentos de ADN que aparece en las células apoptóticas da lugar a una multitud de terminaciones 3'-hidroxilo en el ADN. Esta propiedad se puede utilizar para identificar las células apoptóticas mediante el marcado de las terminaciones 3'-hidroxilo con nucleótidos de bromodesoxiuridina trifosfato (Br-dUTP). La encima desoxinucleotidil transferasa (TdT) cataliza una adición independiente de plantillas de desoxirribonucleósidos trifosfato a las 3 terminaciones 'del ADN bicatenario o monocatenario con extremos romos, ahuecados o salientes. Hay un número considerable de estas ubicaciones en células apoptóticas, lo que supone la base del método que se utiliza con APO-BRDU™ Kit. Pruebas recientes han demostrado que la Br-dUTP se incorpora más fácilmente al genoma de las células apoptóticas que los desoxinucleótidos trifosfato que forman complejos con ligantes mayores como la fluoresceína, la biotina o la digoxigenina. Esta mejor incorporación permite que la señal de la citometría de flujo sea más brillante al identificar las ubicaciones de la BR-dUTP mediante anticuerpos monoclonales marcados con anti BrdU. Las células no apoptóticas no incorporan cantidades significativas del Br-dUTP debido a la falta de terminaciones expuestas de ADN 3'-hidroxilo.

Se suministra suficiente reactivo como para procesar un total de 60 suspensiones de células y se incluyen 5 ml de suspensión de células de control positivo y 5 ml de negativo de aproximadamente 1 x 10⁶ células por ml en etanol al 70 % (v/v).

Aplicación declarada
Inmunocitoquímica, análisis citométrico de flujo