eBioscience™ Mouse Regulatory T Cell Staining Kit #3

El anticuerpo FJK-16s reacciona con Foxp3 de ratón y de rata (otras denominaciones: FORKHEAD BOX P3, SCURFIN, y JM2); no se ha determinado la reactividad cruzada de este anticuerpo con otras proteínas. Foxp3, una proteína de 49-55 kDa, es un miembro de la familia de factores transcripcionales de dominio de horquilla (forkhead)/hélice alada (winged-helix) y se identificó como el gen defectuoso de los ratones ‘scurfy’. Una expresión constitutiva alta del ARNm de Foxp3 se ha mostrado en las células T reguladoras (células Treg) CD4+CD25+, y la expresión ectópica de Foxp3 en las células CD4+CD25- aplica un fenotipo Treg en esas células.

La inmunotransferencia con el anticuerpo FJK-16s ha asignado el epítopo a los aminoácidos 75-125 de la proteína Foxp3 de ratón. En humanos, se ha demostrado que esta región está dividida de forma alternativa al nivel del ARNm. Tanto las isoformas divididas alternativamente como las no divididas están presentes en el subconjunto de linfocitos CD4+CD25+. Los experimentos preliminares de RT-PCR no han revelado la presencia de esta isoforma alternativamente dividida en los esplenocitos de ratón, lo que sugiere que la regulación de genes humanos y de ratón son diferentes.

La tinción intracelular de esplenocitos de ratón con FJK-16s mediante los juegos de tinción de Foxp3 de ratón y el protocolo revelan aproximadamente el 2 % del total de esplenocitos de la cepa C57Bl/6 y aproximadamente de 3-5 % de la cepa de ratón BALB/c. El análisis por citometría de flujo multicolor demuestra aproximadamente el 90 % de las células CD4+CD25+ y el 4 % de las células CD4+CD25- teñido con FJK-16. Las células B220+, CD11b+, CD11c+ y Ly6G/Gr-1+ no muestran una tinción conjunta significativa con FJK-16s. Estos datos son consistentes con un informe reciente que sigue la expresión de Foxp3 mediante una inserción génica de GFP (Fontenot et al, 2005).

FJK-16s tiene reacción cruzada con Foxp3 de rata. Esto se ha demostrado mediante la tinción intracelular de Foxp3 y el análisis de citometría de flujo de esplenocitos de rata utilizando el mismo método y reactivos que se usan para el tejido de ratón. Tenga en cuenta que los anticuerpos CD4 y CD25 incluidos en este juego solo reconocen los antígenos de ratón. Para la tinción de tejidos de rata, utilice (CD4 FITC (n.º de catálogo 11-0040 y CD25 PE, n.º de catálogo 12-0390)

Foxp3 Staining Set antirratón ha sido formulado y optimizado para la tinción de esplenocitos de ratón con el anticuerpo monoclonal FJK-16s.

No incluido:
controles de isotipo para anti CD4 (IgG2a de rata, n.º de catálogo 11-4321) y anti-CD25 (rata IgG1, nº de catálogo 12-4301)

IgG2a
de isotipo

de rata


Reactividad/especie
Aplicación

notificada de ratones
Tinción intracelular seguida de análisis de citometría de flujo