Gránulos magnéticos activados por NHS Pierce™

Los gránulos magnéticos activados por NHS Thermo Scientific Pierce permiten la conjugación covalente basada en aminas de proteínas con gránulos en un formato simple «mix-and-go» para su uso en experimentos de purificación por afinidad personalizados.

Características de los gránulos magnéticos activados por NHS:

• Alta capacidad: al menos cuatro veces más capacidad de unión que la de los gránulos magnéticos activados por NHS de otros proveedores.
• Fácile de usar: inmovilice en una simple reacción de un solo paso, minimizando el tiempo de intervención.
•Seguros: no se necesitan sustancias químicas peligrosas (por ejemplo, cianoborohídrido sódico y bromuro de cianógeno).
• Compatibles con ligandos: utilícelo para inmovilizar con casi cualquier compuesto primario que contenga aminas o ligando de afinidad.
• Baja adherencia no específica: la superficie de los gránulos están prebloqueada y cualquiera de los grupos NHS-éster no reaccionados están completamente cerrado.
• Compatible con protocolos: el acoplamiento de proteínas a los gránulos y las aplicaciones posteriores se pueden realizar manualmente o por automatización (por ejemplo, con equipos Thermo Scientific KingFisher).

Los gránulos magnéticos activados contienen grupos funcionales de N-hidroxisuccinimida (NHS) que reaccionan con las aminas primarias para formar vinculaciones estables de amidas. Una vez que se han fijado covalentemente, las proteínas inmovilizadas son altamente resistentes a la lixiviación de la superficie de los gránulos. Cuando se utilizan gránulos preparados en experimentos, la unión no específica es insignificante, ya que los grupos de NHS-éster no reaccionados están completamente bloqueados durante el proceso de acoplamiento. Los gránulos magnéticos activados por NHS pueden usarse manualmente con un soporte magnético o con plataformas automáticas, como los equipos Thermo Scientific KingFisher.

Aplicaciones:
• Inmovilización de ligandos para la purificación de proteínas recombinantes
• Inmovilización de anticuerpos para inmunoprecipitaciones y coinmunoprecipitaciones sin contaminación de anticuerpos en los eluidos
• Inmovilización de anticuerpos secundarios para la purificación por afinidad de subtipos de anticuerpos a partir de ascitis, suero y sobrenadante de cultivo celular

Los gránulos magnéticos activados por NHS ofrecen una forma práctica de conjugar cualquier proteína deseada en una superficie de gránulos magnéticos. El proceso no requiere sustancias químicas peligrosas ni planes de reacción prolongados. Los gránulos se incuban primero con proteína durante 1 a 2 horas en un tampón libre de amina a un pH de 7 a 9 para conseguir un acoplamiento covalente a través de la sustancia NHS-éster. A continuación, se lavan los gránulos para que cualquier grupo activo restante del NHS-éster se cierre. La reacción química reactiva a la amina y el posterior cierre se completan en 3 a 4 horas. La proteína acoplada no se lixiva de la superficie del gránulo. Además, los gránulos presentan un nivel de adherencia no específica muy bajo debido a un cierre eficaz y a un agente de bloqueo exclusivo que cubre la superficie del gránulo base. Después de la conjugación, los gránulos magnéticos preparados se utilizan, normalmente, en procedimientos de purificación por afinidad.