Amplex™ Red Phosphatidylcholine-Specific Phospholipase C Assay Kit
Amplex™ Red Phosphatidylcholine-Specific Phospholipase C Assay Kit
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Amplex™ Red Phosphatidylcholine-Specific Phospholipase C Assay Kit

El kit de ensayo de fosfolipasa C específica de fosfatidilcolina Amplex™ Red proporciona un método sensible para detectar la actividadMás información
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Número de catálogoCantidad
A12218500 ensayos
Número de catálogo A12218
Precio (MXN)
-
Cantidad:
500 ensayos
El kit de ensayo de fosfolipasa C específica de fosfatidilcolina Amplex™ Red proporciona un método sensible para detectar la actividad de fosfolipasa C específica de fosfatidilcolina (PC-PLC) mediante un lector de microplacas de fluorescencia o un fluorímetro.

Consulte nuestra línea completa de ensayos de microplacas de fluorescencia.

• Detecta niveles de actividad de fosfolipasa-C de tan solo 0,2 mU/ml
• Su formato permite realizar varias mediciones en un punto de tiempo
• Diseñado para una mínima interferencia de autofluorescencia

En este ensayo de acoplamiento enzimático, la actividad de PC-PLC se supervisa indirectamente usando 10-acetil-3,7-dihidroxifenoxacina (reactivo Amplex™ Red), una sonda fluorogénica sensible para el peróxido de hidrógeno. La PC-PLC convierte la fosfatidilcolina (lecitina) en fosfocolina y diacilglicerol. Se añade fosfatasa alcalina, que hidroliza la fosforilcolina para formar la colina. La colina se oxida mediante la colina oxidasa para formar betaína y peróxido de hidrógeno. En presencia de la peroxidasa de rábano, el peróxido de hidrógeno reacciona con el reactivo Amplex™ Red en una proporción estequiométrica 1:1 para crear un producto altamente fluorescente, la resorufina.

Como la resorufina tiene unos valores máximos de absorción y emisión de fluorescencia de aproximadamente 571 nm y 585 nm respectivamente, hay poca interferencia de autofluorescencia en la mayoría de las muestras biológicas.

Utilice ensayos Amplex™ Red para una amplia gama de investigaciones
Hay disponible una amplia variedad de ensayos Amplex™ Red para el estudio de la señalización de células y lípidos, la neurobiología, el funcionamiento de procesos inflamatorios e inmunitarios, y el metabolismo. También ofrecemos el reactivo Amplex™ UltraRed (n.º de cat. A36006), un reactivo de segunda generación que proporciona una mayor sensibilidad y fluorescencia más brillante, y el reactivo de parada Amplex™ Red/UltraRed (n.º cat. A33855). El reactivo de parada Amplex™ Red/UltraRed ofrece comodidad y control, ya que permite terminar la reacción de generación de la señal de fluorescencia en un momento determinado por el usuario. Después de añadir el reactivo de parada, la señal de fluorescencia permanece estable durante al menos tres horas. También hay disponibles diseños de ensayos y envases personalizados.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de detecciónFluorescente
Tipo de coloranteOtras etiquetas o colorantes
FormatoCubetas, placa de 96 pocillos
Cantidad500 ensayos
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
Para utilizar con (aplicación)Ensayo de fosfolipasa C específica de fosfatidilcolina
Para utilizar con (equipo)Fluorímetro, Lector de microplacas
Línea de productosAmplex
Tipo de productoKit de ensayo de fosfolipasa C específica de fosfatidilcolina Red
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Almacenar en el congelador de -5 °C a -30 °C y proteger de la luz.

Preguntas frecuentes

I'm using an Amplex Red kit, the reagent changes color to pink almost immediately in my own Krebs-Ringer buffer but not in HBSS. Why is this?

The components of Krebs-Ringer buffer (salts) should not cause oxidation of the Amplex reagent (which, in the presence of peroxidase and H2O2 oxidizes to resorufin, which is pink in color and fluorescent). Try water alone (the water used to make the Krebs-Ringer buffer). Since Hank's Buffered Saline Solution is typically purchased rather than made in the lab, it likely would not have the same contaminant. Another option is to degas the buffer prior to use to removed dissolved oxygen radicals.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Can Amplex Red Assays be performed using cell lysates?

This is not recommended. The presence of endogenous proteases can complicate the assay by degrading the horseradish peroxidase (HRP). Endogenous peroxidases and antioxidants can modify the H2O2 required for the reaction, competing with HRP (and catalase) for the substrate.

The Amplex Red Assays are best performed with either purified enzymes or extracted H2O2 in a defined buffer system, extracellular solutions or body fluids (media, serum, etc.) that do not exhibit high levels of endogenous protease or oxidase activity and do not contain antioxidants.

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Citations & References (13)

Citations & References
Abstract
CDP-choline significantly restores phosphatidylcholine levels by differentially affecting phospholipase A2 and CTP: phosphocholine cytidylyltransferase after stroke.
Authors:Adibhatla RM, Hatcher JF, Larsen EC, Chen X, Sun D, Tsao FH
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16380371
'Phosphatidylcholine (PtdCho) is a major membrane phospholipid, and its loss is sufficient in itself to induce cell death. PtdCho homeostasis is regulated by the balance between hydrolysis and synthesis. PtdCho is hydrolyzed by phospholipase A2 (PLA2), PtdChospecific phospholipase C (PtdCho-PLC), and phospholipase D (PLD). PtdCho synthesis is rate-limited by CTP:phosphocholine ... More
The antisignaling agent SC-alpha alpha delta 9, 4-(benzyl-(2-[(2,5-diphenyloxazole-4-carbonyl)amino]ethyl)carbamoyl)- 2-decanoylaminobutyric acid, is a structurally unique phospholipid analogue with phospholipase C inhibitory activity.
Authors:Vogt A, Pestell KE, Day BW, Lazo JS, Wipf P,
Journal:Mol Cancer Ther
PubMed ID:12481409
'Phospholipids and lipid second messengers mediate mitogenic signal transduction and oncogenesis, but there have been few successful examples of small molecules that affect biologically important phospholipid metabolism. Here we investigated the actions of a previously described antitumor agent, 4-(benzyl-(2-[(2,5-diphenyloxazole-4-carbonyl)amino]ethyl)carbamoyl)- 2-decanoylaminobutyric acid (SC-alpha alpha delta 9), which has antisignaling properties, on ... More
Defective coupling of apical PTH receptors to phospholipase C prevents internalization of the Na+-phosphate cotransporter NaPi-IIa in Nherf1-deficient mice.
Authors:Capuano P, Bacic D, Roos M, Gisler SM, Stange G, Biber J, Kaissling B, Weinman EJ, Shenolikar S, Wagner CA, Murer H
Journal:Am J Physiol Cell Physiol
PubMed ID:16987995
'Phosphate reabsorption in the renal proximal tubule occurs mostly via the type IIa Na(+)-phosphate cotransporter (NaP(i)-IIa) in the brush border membrane (BBM). The activity and localization of NaP(i)-IIa are regulated, among other factors, by parathyroid hormone (PTH). NaP(i)-IIa interacts in vitro via its last three COOH-terminal amino acids with the ... More
Enzymatic measurement of phosphatidylserine in cultured cells.
Authors:Morita SY, Shirakawa S, Kobayashi Y, Nakamura K, Teraoka R, Kitagawa S, Terada T,
Journal:J Lipid Res
PubMed ID:22100437
Phosphatidylserine (PS) is a quantitatively minor membrane phospholipid involved in diverse cellular functions. In this study, we developed a new fluorometric method for measuring PS using combinations of specific enzymes and Amplex Red. The calibration curve for PS measurement was linear and hyperbolic at low (0-50 µM) and high (50-1000 ... More
Phosphatidylcholine-specific phospholipase C activation is required for CCR5-dependent, NF-kB-driven CCL2 secretion elicited in response to HIV-1 gp120 in human primary macrophages.
Authors:Fantuzzi L, Spadaro F, Purificato C, Cecchetti S, Podo F, Belardelli F, Gessani S, Ramoni C,
Journal:Blood
PubMed ID:18203956
CCL2 (MCP-1) has been shown to enhance HIV-1 replication. The expression of this chemokine by macrophages is up-modulated as a consequence of viral infection or gp120 exposure. In this study, we show for the first time that the phosphatidylcholine-specific phospholipase C (PC-PLC) is required for the production of CCL2 triggered ... More
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