pcDNA™3.4 TOPO™ TA Cloning Kit
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pcDNA™3.4 TOPO™ TA Cloning Kit

El vector pcDNA™ 3.4 TOPO™ es un vector de expresión constitutiva de mamíferos diseñado para ofrecer niveles excepcionalmente altos deMás información
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Número de catálogoCantidad
A1469720 μg
Número de catálogo A14697
Precio (MXN)
-
Cantidad:
20 μg
El vector pcDNA™ 3.4 TOPO™ es un vector de expresión constitutiva de mamíferos diseñado para ofrecer niveles excepcionalmente altos de expresión transgénica. Puede usarse en células adaptadas a la suspensión, como Expi293F™, FreeStyle™ 293-F y FreeStyle™ CHO-S, para una expresión de proteínas transitorias. El vector se puede utilizar también como un plásmido de expresión seleccionable de Geneticin™ para la ingeniería de líneas celulares estables. El promotor mejorado con CMV de longitud completa y otros elementos de expresión suelen permitir mayores niveles de expresión que las construcciones de expresión basadas en pcDNA™ 3.1, 3.2 y 3.3.

El vector pcDNA 3.4 TOPO™ contiene los siguientes elementos:

• La longitud total de promotor/potenciador inmediato-precoz del citomegalovirus humano (CMV) para una expresión génica de alto nivel en una gran variedad de células de mamíferos
• WPRE (elemento regulador postranscripcional Woodchuck) secuencia abajo del sitio de clonación para mejorar la expresión del transcrito
• Sitio de clonación TOPO™ para una clonación rápida y eficaz (> 85 %) de productos PCR amplificados con Taq
• Gen de resistencia a la neomicina para la selección de líneas celulares estables con Geneticin™
• Origen pUC para una alta replicación de copias y el mantenimiento de plásmido en E. coli

El kit de pcDNA3.4™ TOPO™ TA Cloning incluye un vector de plásmido adaptado a TOPO™, reactivos para clonación de PCR del gen seleccionado en el vector, un primer de secuenciación para la confirmación de la orientación de los insertos, así como células competentes One Shot™ TOP10.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosAmpicilina (AMPR)
Método de clonaciónTOPO™-TA
Sistema constitutivo o inducibleConstitutivo
Tipo de entregaTransfección
Para utilizar con (aplicación)Producción de proteínas, expresión constitutiva
PlásmidoPlasmídico de alto número de copias
Línea de productosTOPO
Tipo de productoKit de clonación de TA
PromotorCMV
Etiqueta de proteínaSin etiquetar
Cantidad20 μg
Origen de replicaciónOrigen de pUC
Agente de selección (eucariótico)Geneticin™ (G-418)
Marcador de selección eucariotaNeoR
Promotor del marcador de selecciónPromotor de SV40
VectorpcDNA
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Almacene el vector de pcDNA™3.4-TOPO™ y todos los reactivos de clonación a -20° C.
Almacene células de One Shot™ TOP10 químicamente competentes E. coli a -80 °C.

Preguntas frecuentes

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

Can I use a different 293 cell line with the Expi293 Expression System?

Other 293 cell lines may be used with the Expi293 Expression System. However, before these cell lines may be used for transfection studies, they must be adapted to serum-free, suspension culture in Expi293 Expression Medium and evaluated for transfection and expression.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

What is the difference between pcDNA 3.4-TOPO TA and pcDNA 3.3-TOPO TA vectors?

pcDNA 3.4-TOPO TA vector is an improvement over pcDNA 3.3-TOPO TA vector. It contains the WPRE (Woodchuck Posttranscriptional Regulatory Element) that allows for 2- to 3-fold higher levels of expression than pcDNA 3.3-TOPO TA vector.

Which vector do you recommend using with the Expi293 Expression System?

We recommend using the pcDNA 3.4-TOPO TA vector (Cat. No. A14697). This vector contains the native, full-length CMV promoter and a WPRE (Woodchuck Posttranscriptional Regulatory Element) downstream of the cloning site, both of which contribute to high level gene expression (about 2-3 fold higher expression than with pcDNA3.3 TOPO vector, which in turn provides 2-5 fold higher expression than with a standard pcDNA vector). Of course, the expression level is also protein-dependent.

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