Reactivos y kits de enriquecimiento de fosfopéptidos High Select™

La espectrometría de masas (MS) es una herramienta clave para identificar sitios de fosforilación de proteínas y cuantificar los cambios de fosforilación. Sin embargo, el análisis de MS de la fosforilación de proteínas es problemático debido a la baja estequiometría, la alta hidrofilicidad, la escasa ionización y la fragmentación incompleta de los fosfopéptidos. Debido a la baja abundancia relativa de modificaciones de fosforilación en muestras de proteínas complejas, el enriquecimiento es esencial para el análisis exitoso de MS de fosfopéptidos. Los kits de enriquecimiento de fosfopéptidos High-Select Fe-NTA y TiO₂ complementan nuestros reactivos de lisis, reducción, alquilación y digestión, junto con nuestras columnas de centrifugación de fraccionamiento de péptidos de fase reversa C18, de grafito y de pH alto para proporcionar un flujo de trabajo completo para el enriquecimiento de fosfopéptidos.

• Práctico:—tampones preformulados para facilidad de uso en columna de centrifugación (Fe-NTA y TiO₂) o formatos magnéticos (Fe-NTA) para permitir el procesamiento paralelo de varias muestras
• Alta especificidad: recupera fosfopéptidos con > 90 % de selectividad
• Recuperación superior: enriquece más fosfopéptidos totales y únicos que otras resinas disponibles en el mercado
• Alta cobertura: recupera péptidos con sitios de fosforilación únicos y múltiples
• Ampliable: —compatible con la automatización, incluido el uso de procesadores de partículas magnéticas KingFisher

El kit de enriquecimiento de fosfopéptidos de HFe-NTA de alta selección enriquece fosfopéptidos de muestras complejas utilizando resina de quelato de hierro en columnas de centrifugación. Cada columna puede enriquecer fosfopéptidos de 0,5 a 5 mg de digestión total de proteínas como muestra inicial. Junto con tampones preformulados, el procedimiento mejorado y simplificado enriquece hasta 150 µg de fosfoléptidos con una selectividad superior al 90 % en menos de 45 minutos.

El kit de enriquecimiento de fosfopéptidos de alta selección TiO2 incluye 24 puntas de centrifugación de dióxido de titanio (TiO2) con tampones optimizados para facilitar la preparación de fosfopéptidos enriquecidos. Cada columna puede enriquecer fosfopéptidos de 0,5 a 3 mg de digestión total de proteínas como muestra inicial. Los tampones optimizados y el procedimiento simplificado eliminan la necesidad de pirrolidina en el tampón de elución y la posterior limpieza mediante columnas de centrifugación de grafito. El uso de este kit produce un enriquecimiento de hasta 150 µg de fosfolopéptidos con una selectividad superior al 90 %. TiO2 enriquece un conjunto único de fosfopéptidos que complementa el kit de enriquecimiento con fosfopéptidos High-Select Fe-NTA IMAC.

El kit de enriquecimiento de fosfopéptidos magnéticos High-Select Fe-NTA enriquece los fosfoléptidos de muestras complejas mediante partículas de agarosa magnética de quelato de hierro. Cada reacción es suficiente para enriquecer 250–1000 µg de fosfopéptidos a partir de 0,5–5 mg de digestión total de proteínas como muestra inicial en menos de 45 minutos. Además, el kit también se puede utilizar para enriquecer péptidos modificados químicamente con grupos funcionales diseñados para su uso con resinas de cromatografía de afinidad de metales inmovilizadas.

La agarosa magnética de Fe-NTA High-Select se ha diseñado específicamente para enriquecer fosfoléptidos y péptidos modificados químicamente para el análisis de MS. Nuestras partículas superparamagnéticas no agregantes, magnetita (Fe₃O₄), tienen una uniformidad excepcional para un alto rendimiento mediante aplicaciones de purificación manuales y automatizadas. La agarosa magnética de Fe-NTA está disponible por separado para proporcionar flexibilidad en el diseño experimental.

Para el análisis de alta resolución de fosfopéptidos enriquecidos, la columna LC recomendada para la fuente Nanospray Flex es la columna LC Acclaim PepMap 100 C18 (n.º de cat. 164942 o 164939). Para la fuente EASY-Spray, la columna LC recomendada es la columna de LC Easy-Spray C18 (N.º de ES902 o ES903). Las partículas de agarosa magnética High-Select Fe-NTA independientes proporcionan flexibilidad para la escala y el rendimiento y se pueden utilizar en plataformas manuales y automatizadas, incluidos los procesadores de partículas magnéticas Kingfisher 96 y Kingfisher Flex.