Ensayo de células T CD8+ PureQuant™
Ensayo de células T CD8+ PureQuant™
Applied Biosystems™

Ensayo de células T CD8+ PureQuant™

Los ensayos Applied Biosystems PureQuant son una familia de ensayos que identifican y cuantifican con precisión tipos específicos de célulasMás información
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Los ensayos Applied Biosystems PureQuant son una familia de ensayos que identifican y cuantifican con precisión tipos específicos de células inmunitarias en una población celular mixta. Estos ensayos se basan en TaqMan y qPCR y miden la metilación del ADN genómico en sitios específicos que sirven como identificador único. Los ensayos incluyen estándares y controles y cada placa de 96 pocillos puede alojar hasta siete muestras de ensayo. Los resultados se proporcionan como un porcentaje del tipo de celda seleccionada de las celdas de entrada totales mediante una herramienta de análisis libre.

El ensayo de células T CD8+ PureQuant utiliza el gen CD8B como marcador epigenético para las células T CD8+; el ensayo está enfocado a los elementos reguladores dentro de su tercer intrón (consulte http://stm.sciencemag.org/content/10/452/eaan3508).

Entre las ventajas se incluyen:
Rendimiento comprobado: la tecnología principal se ha utilizado para la identificación y cuantificación de los tipos de células inmunitarias durante más de una década
Fácilmente estandarizado: el método qPCR permite obtener resultados uniformes en varios usuarios, instrumentos y centros
Facilita la presentación de trámites normativos: las especificaciones técnicas se establecieron siguiendo las directrices ICHQ2(R1)
Programación flexible: el ensayo se puede realizar usando células o ADNg frescas o congeladas

Los ensayos incluyen todos los reactivos, estándares y controles necesarios para realizar el ensayo. Los componentes específicos son los siguientes:
Calibrador: corrige la variación en la eficiencia de conversión de bisulfito. El calibrador a base de plásmidos alberga las regiones genómicas elegidas en proporciones equinolares e incluye GAPDH. Sometido a conversión de bisulfito seguido por la estimación del número de copias mediante la curva estándar qPCR. Permite la estimación del factor de eficiencia de bisulfito específico del ensayo: la proporción entre el número de copias de TPG/GAPDH medidos desde el mismo plásmido.
Referencia: comprueba el rendimiento del ensayo. Consiste en ADN genómico extraído de sangre la humana de donantes sanos combinados. Los valores de referencia representan el rango esperado del tipo de celda elegida. Por ejemplo, las células CD8+ son generalmente más abundantes que las células Treg o Th17.
Estándares: determina el número de copias desconocido. Consta de seis diluciones que abarcan un rango dinámico lineal de 4 log (30-31250 copias). Los números de copia absolutos se pueden determinar de forma fiable mediante la pendiente y la intersección de las respectivas curvas estándar.

Este producto se fabrica en una planta con un sistema de control de calidad certificado ISO9001.
Para su uso en investigación o fabricación de productos basados en células, genes o tejidos. PRECAUCIÓN: no diseñado para la administración directa en seres humanos o animales.
Especificaciones
Método de detecciónDetección de cebador-sonda
Para utilizar con (aplicación)Células, ADN
Cantidad28 reacciones
Condiciones de envíoAprobado para su envío a temperatura ambiente o en hielo húmedo o seco
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
  • Kit de ADN genómico de silano Dynabeads, almacenar de 2 °C a 8 °C
  • 1 mezcla maestra de qPCR PureQuant de 2 ml, almacenar de 2 °C a 8 °C
  • 4 ABS
  • THFA, almacenar a temperatura ambiente
  • Módulo PureQuant CD8, almacenamiento de -15 a -25 °C (sondas y cebadores CD8 y GAPDH TaqMan, ADN de referencia, ADN lambda, ADN estándar)

Preguntas frecuentes

In the PureQuant assays, can I make changes to the data analysis template?

No, the template is locked and no changes can be made to the formulas and calculations. In the event of a bad/outlier replicate (or replicates), consult the instruction tab of the template for guidance on performing analysis in these cases.

If I am new to the PureQuant technology, do you have a suitable product that I can use as an orthogonal method for comparison?

Yes, we've developed the corresponding eBioscience Essential Phenotyping kits for flow cytometry characterization of T cells, regulatory T cells, and type 1 and type 17 T helper cells. These kits were used during the development of the PureQuant CD8+, Treg, and Th17 Assays.

Can alternative bisulfite conversion kits or reagents (for example sodium bisulfite) be used for bisulfite conversion?

No, the bisulfite conversation kit was optimized specifically for the PureQuant Assays. The ammonium bisulfite and THFA were selected from specific suppliers and using alternatives will jeopardize performance of the assays.

Do the PureQuant assays require specific qPCR instrumentation to run?

No. The assays have been demonstrated to work on Thermo Fisher qPCR instrumentation and other competitor platforms. The only requirement is that the instrument must be compatible with FAM and non-fluorescent quencher or their respective equivalents.

Since the PureQuant assay technology is licensed-in from a third party, are there any restrictions on its use?

Yes, the Limited Use Label License is as follows:
Notice to Purchaser: The purchase of this product conveys to the purchaser the limited, non-transferable rights under licensed patents for the purchaser to use the product only to (a) perform research and development intended to support the manufacturing of cell therapy products that are intended for subsequent administration to human patients and (b) quality control testing for use in the manufacture of cellular therapy products that are intended for subsequent administration to human patients. This product is not for use in any testing or analysis for any other purpose, any provision of services or any third party commercial use conducting clinical trials monitoring services on patient samples. No right to resell this product or any of its components is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. For information on obtaining additional rights, please contact outlicensing@thermofisher.com, Licensing and Commercial Supply, Thermo Fisher Scientific, 5823 Newton Drive, Carlsbad, CA, 92008, United States