Kit de captura de ARN Click-iT™ Nascent, para análisis de expresión génica

El kit de captura de ARN Click-iT™ Nascent utiliza nuestra exclusiva química Click-iT™ para capturar con alta eficacia y sensibilidad ARN recién creado. Con el enfoque de Click-iT™ se pueden realizar estudios sobre análisis de alta resolución de la regulación génica junto con la regulación del ARN, la estabilidad del ARN, la síntesis de ARN, la decadencia y la degradación del ARN, la regulación transcripcional, los ensayos delta⁄delta C(t), los ensayos nucleares run on⁄run off, etc. Los homólogos de etileno uridina (UE) ribonucleótidos que contienen un grupo alcalino reactivo se introducen en las células o los tejidos. Una vez incorporados, las células se lisan y el ARN se aísla. La biotina azida se somete a química clic y, a continuación, se usan gránulos magnéticos de estreptavidina para capturar el nuevo grupo de ARN sintetizado. Los ARN capturados se amplifican y los ADNc resultantes se usan en varias metodologías posteriores a la captura. Lo hemos validado para matrices (tanto de alta densidad como de baja densidad), secuenciación en análisis delta CT mediante qPCR basada en SOLiD™ y SYBR™ o TaqMan™. Solo se necesitan 25.000 células para el análisis de las nuevas transcripciones inducidas. El kit permite etiquetar y capturar 40 condiciones que se pueden dividir en 400 ensayos analíticos individuales. Con un precio de alrededor de un dólar por ensayo, es perfecto para los investigadores de entornos académicos e industriales.

Las células toleran bien el reactivo EU en la concentración recomendada de 200 µM. En una pantalla de matriz de más de 32.000 genes podríamos detectar solo los cambios más leves en 12, en comparación con un vehículo de control. Además, en la primera concentración de alimentación, cinco veces la recomendada (200 µM frente a 1,0 mM), no hubo efectos sobre un grupo de genes de mantenimiento ni en la capacidad de las células para proliferar normalmente. Se confirmó la sensibilidad y la fiabilidad en una matriz de densidad baja (TLDA™) de genes apoptóticos. El grupo emergente capturado detectó de manera exacta todas las transcripciones apoptóticas (inducidas por estaurosporina) caracterizadas anteriormente sin ningún cambio perceptible en la información de secuencia.

*Descubrimiento, no solo recuperación*. En las últimas décadas, los esfuerzos genómicos han revelado que solo el 2 % del genoma humano codifica proteínas, lo que deja al 98 % sin información genética. Este nuevo enfoque ayudará notablemente en la transcriptómica de esta década a descubrir la finalidad y los patrones de expresión de este amplio contenedor de secuencias desconocidas.

*Capacidad para estudiar la estabilidad del ARN. * Para otros, la posibilidad de descubrir la estabilidad del ARNm sin necesidad de radioactividad será la función clave que ofrezca este enfoque. En el pasado, las vidas medias de las transcripciones se derivaban con nucleótidos radioactivos en experimentos nucleares run-on y run-off tradicionales. Este enfoque, caracterizado por su peligrosidad y complejidad, se considera un fuerte retroceso: ahora, estos valores críticos se pueden obtener de forma sencilla, segura y fiable.

*¿Quiere conocer las novedades?* Incorpore la línea Click-iT de análogos metabólicos para etiquetar el nuevo material. Sin radioactividad ni dificultad para usar haptenos. Conozca las novedades en ADN, ARN, proteínas, azúcares, PTM y mucho más.
*Tecnología Click-iT™: una reacción, infinitas posibilidades.*