Kit de ensayo de síntesis de proteínas Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 594

El kit de ensayo de síntesis de proteínas Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 594 proporciona un método rápido, sensible y no radiactivo para la detección de síntesis de proteínas mediante microscopía de fluorescencia o imágenes de alto contenido. En este ensayo, la puromicina o-propargil (OPP) se incorpora de forma eficaz a las proteínas recién traducidas en medios completos que contienen metionina y se etiqueta con fluorescencia con un tinte Alexa Fluor™ brillante y fotoestable en una reacción de clic rápida, altamente específica y leve.

Las características del kit incluyen:

• No es necesario cambiar de medio: funciona en medios completos que contienen metionina, por lo que no es necesario eliminar medios celulares
• Compatible con Multiplex: la tecnología Click-iT™ Plus retiene la señal de GFP y la unión de faloidinas conjugadas con fluorescencia
• No radioactivo: una alternativa a los métodos tradicionales de ³⁵S-metionina
• Trabajos in vivo: los resultados publicados muestran el uso in vivo para la determinación de la traducción de proteínas

El kit contiene puromicina o-propargil (OPP), que es un alquino análogo de puromicina (también disponible de manera individual), así como azida picolil Alexa Fluor™ 594 y todos los reactivos necesarios para llevar a cabo la reacción de clic. La OPP se usar para alimentar a células cultivadas y se incorpora a proteínas durante la síntesis de proteínas activas. La adición de azida picolil Alexa Fluor™ 594 y los reactivos de reacción Click conduce a una ligadura quimioselectiva, o reacción de «clic», entre el tinte azida picolol y el alquino OPP, lo que permite que el análisis basado en imágenes detecte las proteínas modificadas.

La reacción de clic utiliza fracciones biortogonales (biológicamente únicas) para etiquetar con fluorescencia las células proliferantes, lo que ayuda a producir bajos fondos y alta sensibilidad de detección. Debido a las condiciones de reacción leves, los ensayos Click-iT™ Plus detectan los eventos de traducción de proteínas al mismo tiempo que permiten la preservación de la morfología celular, la unión de la faloidina marcada con fluorescencia y la señal fluorescente de la GFP.

A diferencia de la ³⁵S-metionina utilizada en métodos tradicionales, la OPP no es un análogo de aminoácidos, por lo que puede añadirse directamente a las células en medios completos o utilizarse para determinar la síntesis de proteínas in vivo.

El kit contiene todos los componentes necesarios para etiquetar y detectar la OPP incorporada en proteínas recién traducidas en muestras de células adherentes. El kit incluye reactivos suficientes para etiquetar 25 cubreobjetos 18 mm × 18 mm usando 1 ml de tampón de reacción por prueba.