CellLight™ Null (control), BacMam 2.0

CellLight™ Null Control está diseñado para usarse como control de transducción negativo con nuestros reactivos de tinción de células vivas de proteínas fluorescentes CellLight™. CellLight™ Null Control no contiene ningún promotor de mamífero ni ningún transgénico. Los reactivos CellLight™ combinan la utilidad y selectividad de las proteínas fluorescentes con la eficiencia de transducción de la tecnología BacMam, lo que permite la tinción inequívoca de orgánulos, estructuras celulares y procesos en células vivas de mamíferos. Se suministran en un formato listo para su uso: simplemente añada, incube y obtenga imágenes con una expresión muy eficaz en líneas celulares, células primarias, células madre y neuronas.

CellLight™ Null Control es:

• Altamente eficaz: > 90 % de la transducción de una amplia gama de líneas celulares de mamíferos, incluidas las células primarias, las células madre y las neuronas.
• Rápido y práctico: Simplemente añada el reactivo CellLight™ Null Control a las células, incube durante la noche y evalúe cómo las células toleran la transducción de BacMam.
• Seguro: Los reactivos CellLight™ no se replican en células de mamíferos, no tienen ningún efecto citopático de observable y son adecuados para manipulación de nivel de bioseguridad (BSL) 1.

Principio de los reactivos CellLight™
Otros reactivos CellLight™ son construcciones fusionadas de péptidos de señal o proteínas de estructura celular con emGFP, TagRFP o CFP Premiere que se dirigen de forma precisa y específica a estructuras y compartimentos subcelulares. Disponibilidad de una gran variedad de objetivos, incluyendo citoesqueleto, mitocondrias y compartimentos de secreción, para una práctica multiplexación, estudios de colocalización y adquisición de imágenes de los procesos celulares dinámicos donde se requiere una alta resolución espacial y temporal. Los reactivos CellLight™ toleran la fijación con formaldehído y, por tanto, son compatibles con el análisis de células fijas.

Tecnología BacMam
La tecnología BacMam está basada en un virus de insecto (baculovirus) para una transducción eficiente y una expresión transitoria en células de mamíferos. El baculovirus se ha modificado para incluir un casete de expresión que contiene la construcción fusionada CellLight™.

BacMam 2.0 incorpora elementos que mejoran en gran medida la eficiencia de la transducción y los niveles de expresión: una proteína de cápside pseudotipada para una entrada celular más eficiente, un promotor de CMV mejorado, y el elemento regulador postranscripcional de la hepatitis Woodchuck (WPRE).

Los baculovirus no se replican en las células de mamíferos, lo que les da un excelente perfil de seguridad y una falta de efectos citopáticos en las células de los mamíferos.

Comodidad del flujo de trabajo
A diferencia de los vectores de expresión, los reactivos BacMam habilitan la expresión titratable y reproducible de proteínas transitorias. No es necesario recurrir a métodos de transfección difíciles ni a la tediosa clonación. Para conseguir una expresión altamente eficiente incluso en células sensibles, como células madre, neuronas y células primarias, basta con añadir los reactivos CellLight™ a las células en un medio completo, incubar y obtener imágenes al día siguiente. O bien, mezcle el reactivo CellLight™ y las células en el momento de la siembra en placa.

Las eficiencias de cotransducción son elevadas, lo que permite utilizar fácilmente varios reactivos CellLight™ en el mismo experimento si es necesario etiquetar varias estructuras o vías. Los reactivos CellLight™ también toleran la fijación con formaldehído y, por tanto, son compatibles con el análisis de células fijas basado en anticuerpos.

Normalmente, las células transducidas transitoriamente expresan la proteína de fusión durante unos cinco días, aunque en células que se dividen lentamente, como algunos tipos de células primarias, la expresión se ha demostrado durante hasta dos semanas; en neuronas diferenciadas terminalmente hemos registrado imágenes más de tres semanas después de la transducción.