TOP10F' Electrocomp™ Kit

El genotipo de las células TOP10F’ es idéntico al de las células TOP10, con la adición de un episoma F'.Más información

Número de catálogo	Cantidad
C66511	10 x 100 μl

Número de catálogo C66511

Precio (MXN)

Cantidad:

10 x 100 μl

El genotipo de las células TOP10F’ es idéntico al de las células TOP10, con la adición de un episoma F'. El episoma F' contiene el gen de resistencia a la tetraciclina y permite aislar al ADN de una sola cadena de vectores que tengan un origen de replicación de f1. Además, el episoma F contiene el represor lacI^q para la expresión inducible de los promotores trc, tac y lac con IPTG. Las células TOP10F requieren inducción IPTG para la detección del color azul/blanco.

El genotipo de las células TOP10F ofrece las siguientes características:

• hsdR para una transformación eficaz de ADN no metilado procedente de amplificaciones de PCR
• mcrA para una transformación eficaz de ADN metilado procedente de preparaciones genómicas
• lacZΔM15 para la detección del color azul/blanco de clones recombinantes
• endA1 para unas preparaciones de ADN más transparentes y mejores resultados en aplicaciones posteriores debido a la eliminación de la digestión inespecífica por parte de endonucleasa I
• recA1 para reducir los casos de recombinación inespecífica en ADN clonado
• Represor lacI^q para la expresión inducible de los promotores trc, tac, and lac

Nota: Este kit contiene suficientes células electrocompetentes para 25 x 40 µl rxns o 50 x 20 µl rxns. Consulte el manual del producto para conocer las recomendaciones de escalas de reacción.

Genotipo:
F'{lacI^qTn10(Tet^R)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones

Tramado azul/blancoSí

Clonación de ADN metiladoSí

Clonación de ADN inestableNo es adecuado para clonar ADN inestable

Mejora la calidad de los plásmidosSí

PlásmidoSe puede utilizar para plasmidos > 20 kb

Preparación de ADN no metiladoNo es adecuado para preparar ADN no metilado

Línea de productosElectrocomp

Tipo de productoKit Electrocomp

Cantidad10 x 100 μl

Reduce la recombinaciónSí

Condiciones de envíoDry Ice

Nivel de eficiencia de transformaciónAlta eficiencia (> 10^9 cfu⁄μg)

FormatoTubo

EspecieE. coli

Unit SizeEach

Contenido y almacenamiento

Este kit contiene una cantidad suficiente de células eléctricamente competentes para reacciones de 40 x 20 μL o 40 x 20 μL Consulte el manual del producto para conocer las recomendaciones de escalas de reacción.

Preguntas frecuentes

What advantages do your Stbl2 cells offer over other cloning strains?

There are other strains available that may function similarly to Stbl2 cells in stabilizing inserts or vectors with repeated DNA sequences. However, one advantage of Stbl2 cells over many similar strains is that they are sensitive to Kanamycin, so you can use Stbl2 to propagate plasmids containing a Kanamycin resistance marker.

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

Can encapsulated phagemid DNA or M13 phage be used to infect bacteria?

Single-stranded DNA viral particles like M13 require the presence of an F pilus in order to infect E. coli. This criterion is met by TOP10F', DH5? F'IQ, INV?F', Stbl4, OmniMAX2-T1 and DH12S cells. These cells are not traD mutants, which effectively allows the cells to retain the F' episome. Transforming single-stranded DNA can cause a 100- to 1,000-fold reduction in efficiency compared to viral particles.

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.