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CS32250
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250 preparaciones
El kit de limpieza para PCR ChargeSwitch™-Pro purifica fragmentos de ADN de alta calidad sin el uso de etanol o sales agresivas que se sabe interfieren con las reacciones enzimáticas. El kit ChargeSwitch™-Pro proporciona: • Protocolos sin etanol, guanidinio ni disolventes orgánicos • Rendimiento posterior mejorado • Kit completo para una configuración rápida y sin complicaciones • Un 20 % menos de pasos de manipulación que la mayoría de los protocolos de limpieza para PCR • Purificación de hasta 500 µl de producto de PCR en una columna
Cómo funciona
La tecnología ChargeSwitch™ emplea un mecanismo completamente novedoso que sustituye a reactivos agresivos como sales caotrópicas, etanol o disolventes orgánicos y precipitación de isopropanol con un simple procedimiento de intercambio iónico. En este método, el ADN se une a un ligando de superficie que se carga positivamente a pH bajo, y se eluye cuando el pH se eleva a 8,5 (figura 1). El protocolo ChargeSwitch™-Pro mantiene la facilidad y familiaridad de los protocolos habituales de columnas de centrifugación de sílice usando pasos de unión, lavado y elución (figura 2).
Mejores resultados posteriores
Dado que la tecnología ChargeSwitch™ no requiere el uso de etanol, sales caotrópicas o disolventes orgánicos para la purificación de ácidos nucleicos, el ADN resultante no contiene inhibidores enzimáticos y por lo tanto muestra un mejor rendimiento posterior (figura 3). Se sabe que estos compuestos inhiben muchas reacciones enzimáticas como, por ejemplo, PCR, clonación, digestión de enzimas de restricción y etiquetado de hibridación genómica comparativa (CGH) de matrices. Espere ver una variabilidad reducida en sus aplicaciones de secuenciación, con lecturas superiores a 800 bp con puntuaciones Phred > 20 (figura 4); digestiones de enzimas de restricción limpias (figura 5); y eliminación del exceso de dNTP y primers al 98 % (figura 6).
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
FormatoKit
Características ecológicasMenos recursos utilizados y menos residuos, menos peligroso
Compatibilidad de alto rendimientoNo compatible con alto rendimiento (manual)
Tecnología de aislamientoQuímica ChargeSwitch™
N.º de reacciones250 preparaciones
Línea de productosChargeSwitch
Tipo de productoKit de limpieza de PCR
Cantidad250 preparaciones
Tipo de muestraProducto de PCR
Condiciones de envíoTemperatura ambiente
ObjetivoADN de reacciones enzimáticas (p. ej PCR)
Para utilizar con (aplicación)Next-Generation Sequencing (NGS), Cloning, Standard PCR
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El kit de limpieza para PCR ChargeSwitch™-Pro contiene columnas, tubos de recogida, tubos de recuperación, tampón de unión, tampón de lavado y tampón de elución.
Almacenar a temperatura ambiente. Se garantiza la estabilidad durante 6 meses si se almacena correctamente.
Preguntas frecuentes
I used water to elute my plasmid instead of the Elution Buffer with my ChargeSwitch kit, but saw very low plasmid yield. Why is this?
We strongly recommend using the Elution Buffer provided in the kit, and do not recommend elution with water. If you need to elute in any other buffer, be sure to use a buffer of pH 8.5-9.0 for efficient DNA elution.
What is the difference between the ChargeSwitch Pro kit and the Charge-Switch Pro filter kit?
The filter kit is based upon a dual nested column design, which facilitates the fastest and simplest protocol for obtaining high quality plasmid (less than 10 EU/µg DNA). Modified wash buffer 1 removes more endotoxin.
What is the typical yield when using the ChargeSwitch Pro Filter Plasmid Mini or Midi Kits?
The typical yield is 25 µg from a 5 mL culture for the ChargeSwitch Pro mini kit, 200 µg from a 25 mL culture for the midi kit, and 800 µg from a 100 mL culture from the maxi kit. The plasmid size range for the kits is typically 3-9 kb.
I'm seeing bead carryover with the ChargeSwitch PCR Clean-up Kit. Is this okay for my PCR?
ChargeSwitch coated beads are inert and will not affect PCR. We have found that volumes of as much as 10 µL of beads have no deleterious effects on regular PCR when spiked in. Excessive quantities greater than 10 µL of beads will start to inhibit PCR. Some specific applications may be affected by beads, including real-time reactions or MALDI-TOF. In these applications, repeat the final elution binding as described in the protocol.
How does ChargeSwitch technology work?
Based on a patented switchable chemistry, ChargeSwitch purification utilizes the charge on a solid surface for nucleic acid capture. At lower pH, the surface chemistry holds a positive charge and attracts nucleic acid. At higher pH, the surface chemistry is neutral and any bound nucleic acid is released.