BODIPY™ FL-C₅ NHS Ester (Succinimidyl Ester)

El colorante BODIPY™ FL-C₅ es un colorante fluorescente verde brillante con una excitación y emisión similares a la fluoresceína (FITC) o al colorante Alexa Fluor™ 488. Tiene un alto coeficiente de extinción y rendimiento cuántico de fluorescencia y es relativamente insensible a la polaridad de los disolventes y al cambio de pH. A diferencia de los fluoróforos altamente solubles en agua de los colorantes Alexa Fluor™ 488 y la fluoresceína (FITC), los colorantes BODIPY™ tienen propiedades hidrofóbicas únicas ideales para la coloración de lípidos, membranas y otros compuestos lipofílicos. El colorante BODIPY™ FL-C₅ tiene una vida útil de estado excitado relativamente larga (normalmente 5 nanosegundos o más), lo cual es útil para ensayos basados en la polarización de fluorescencia, y una gran sección transversal de dos fotones para la excitación multifotónica. Además de las formulaciones de colorante reactivo, ofrecemos el colorante BODIPY™ FL-C₅ conjugado con una serie de anticuerpos, péptidos, proteínas, trazadores y sustratos de amplificación optimizados para la detección y el etiquetado celular (más información).

El éster de NHS (o éster de succinimidilo) de BODIPY™ FL-C₅ es la herramienta más utilizada para conjugar el colorante con una proteína o anticuerpo. Los ésteres de NHS se pueden usar para marcar aminas primarias (R-NH₂) de proteínas, oligonucleótidos modificados por aminas y otras moléculas que contengan aminas. Los conjugados BODIPY™ FL-C₅ obtenidos presentan una fluorescencia brillante, unos anchos de banda de emisión estrechos y una vida útil de estado excitado relativamente larga, que puede ser útil para los ensayos de polarización de fluorescencia y microscopia de excitación de dos fotones (TPE).

Este colorante reactivo contiene un espaciador de alquilo C₅ entre el fluoróforo y el grupo éster NHS. Este espaciador ayuda a separar el fluoróforo de su punto de fijación y reduce potencialmente la interacción del fluoróforo con la biomolécula a la que se conjuga.

Información detallada sobre el éster de NHS BODIPY™ FL-C₅:

Etiqueta de fluoróforo: Colorante BODIPY™ FL-C₅
Grupo reactivo: éster de NHS (succinimidilo éster)
Reactividad: Aminas primarias en proteínas y ligandos, oligonucleótidos modificados con aminas
Ex/Em del conjugado: 504/511 nm
Coeficiente de extinción: 87.000 cm-1 m-2
Peso molecular: 417,22

Reacción de conjugación típica
Los reactivos de amina se pueden conjugar con prácticamente cualquier proteína o péptido (el protocolo proporcionado está optimizado para anticuerpos IgG). La reacción se puede ampliar para cualquier cantidad de proteína, pero la concentración de la proteína debe ser de, al menos, 2 mg/ml para obtener unos resultados óptimos. Recomendamos probar tres grados de etiquetado distintos, utilizando tres proporciones molares diferentes del reactivo en la proteína.

El éster de NHS BODIPY™ suele disolverse en dimetilformamida (DMF) anhidra o dimetilsulfóxido (DMSO) de gran calidad, y la reacción se lleva a cabo en un tampón de bicarbonato sódico de 0,1 a 0,2 M, con pH 8,3 y a temperatura ambiente durante 1 hora. Dado que la pKa de la amina terminal es inferior a la del grupo amino épsilon de lisina, puede realizar un etiquetado más selectivo de la terminal amina mediante un tampón más cercano al pH neutro.

Purificación del conjugado
Los anticuerpos marcados se separan normalmente del colorante BODIPY™ no unido mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalente. Para proteínas mucho más o mucho menos voluminosas, seleccione un medio de filtración en gel con un corte de peso molecular adecuado o purifique por diálisis. Ofrecemos varios kits de purificación optimizados para diferentes cantidades de conjugado de anticuerpos:
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 0,5-1 mg (A33086)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 20-50 µg (A33087)
Kit de purificación de conjugado de anticuerpos para 50-100 µg (A33088)

Más información sobre el etiquetado de proteínas y anticuerpos
Ofrecemos una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se ajustan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte nuestros kits de etiquetado de anticuerpos o utilice nuestra herramienta de selección química de etiquetado para otras opciones. Para obtener más información acerca de nuestros kits de marcado, lea la sección 1.2 sobrekits para marcado de proteínas y ácidos nucleicos del manual de Molecular Probes™.

Creamos conjugados personalizados
Si no encuentra lo que busca en nuestro catálogo en línea, le prepararemos el conjugado de anticuerpos o proteínas que desee. Nuestro servicio de conjugación personalizada es eficiente y confidencial, y garantizamos la calidad de nuestro trabajo. Contamos con la certificación ISO 9001:2000.