La fosfatasa alcalina termosensible Thermo Scientific FastAP cataliza la liberación de los grupos 5'- y 3'-fosfato de ADN, ARN y nucleótidos. Esta enzima también elimina grupos fosfato de proteínas.

FastAP es una innovadora fosfatasa alcalina que está activa en todos los tampones de enzimas de restricción Thermo Scientific, así como en tampones de PCR. Este elemento desfosforila todos los tipos de extremos de ADN (romos, 5' y 3'-protuberantes) en 10 minutos a 37 °C. La enzima se inactiva en 5 minutos a 75 °C (consulte la figura 1 en Datos Complementarios). Por lo tanto, no es necesario extraer la fosfatasa alcalina antes de la ligadura.

Características destacadas

• Enzima recombinante
• Desfosforilación rápida: 10 minutos a 37 °C
• Inactivación rápida y completa: 5 minutos a 75 °C
• Digestión simultánea y desfosforilación de ADN vectorial
• 100 % activa en tampones de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y enzimas de restricción
• Limpieza de PCR en conjunción con Exo I
• Desfosforilación de proteínas

Un protocolo para todos los tipos de extremos de ADN:
• 5'-protuberantes
• 3'-protuberantes
• Extremos romos
• Nucleótidos simples

Aplicaciones

• Desfosforilación del ADN de vector de clonación para impedir la recircularización durante la ligación
• Digestión y desfosforilación simultáneas del ADN de vector
• Limpieza de productos de PCR: degradación de nucleótidos antes de la secuenciación del producto de PCR
• Desfosforilación del extremo 5 de ácido nucleico antes del marcado con T4 Polynucleotide Kinase
• Otras aplicaciones en las que la desfosforilación de sustratos de ADN y ARN es necesaria
• Desfosforilación de proteínas

Nota

• la unión de FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase al ADN puede resultar en un cambio de banda en agarosa geles. Para evitarlo, incube las muestras con colorante de carga de ADN 6X y solución SDS a 65 °C durante 10 minutos y enfríelas con hielo antes de la electroforesis.
• FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase está activa en todos los tampones de enzimas de restricción y puede añadirse directamente al ADN digerido. No es necesaria la inactivación por calor de la enzima de restricción antes de la reacción de desfosforilación.