Phusion™ Hot Start II DNA Polymerases (2 U/μL)
Phusion™ Hot Start II DNA Polymerases (2 U/μL)
Thermo Scientific™

Phusion™ Hot Start II DNA Polymerases (2 U/μL)

Las ADN polimerasas de alta fidelidad Thermo Scientific Phusion establecen un nuevo referente para PCR de alto rendimiento. Con unaMás información
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Número de catálogoColorN.º de reacciones
F549LColorless500 reacciones
F537SGreen100 reacciones
F537LGreen500 reacciones
F549SColorless100 reacciones
F549XLColorless2000 reacciones
Número de catálogo F549L
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-
Color:
Colorless
N.º de reacciones:
500 reacciones
Pedido a granel o personalizado
Las ADN polimerasas de alta fidelidad Thermo Scientific Phusion establecen un nuevo referente para PCR de alto rendimiento. Con una tasa de errores 50 veces menor que la de Taq y 6 veces inferior a la de Pfu, las polimerasas de ADN de alta fidelidad Phusion son una opción excelente para la clonación y otras aplicaciones que requieren alta fidelidad. Las ADN polimerasas Phusion ofrecen un rendimiento sólido con tiempos de protocolo cortos, incluso en presencia de inhibidores de PCR, y generan una mayor producción con menos cantidad de enzimas que otras ADN polimerasas.

Mediante el uso de la ADN polimerasa de alta fidelidad Phusion Hot Start II, la amplificación prosigue sin la producción de productos inespecíficos debido a la combinación de la ADN polimerasa Phusion y un ligando Affibody específico unido reversiblemente que inhibe la actividad de la ADN polimerasa a temperatura ambiente. El ligando Affibody también inhibe la actividad de exonucleasa 3´→5´ de la polimerasa, lo que evita la degradación de los primers y del ADN de la plantilla durante la preparación de la reacción. A temperaturas que potencian la actividad de la polimerasa, se libera el ligando, lo que activa completamente la polimerasa. La ADN polimerasa Phusion Hot Start II se reactiva inmediatamente a altas temperaturas, por lo que no requiere un paso de activación independiente en los protocolos de PCR.
La ADN polimerasa de alta fidelidad Phusion Green Hot Start II es una combinación de la ADN polimerasa Phusion Hot Start II y los tampones Phusion Green 5X. Los tampones incluyen un reactivo de densidad y dos colorantes de seguimiento que no interfieren con el sólido rendimiento de la ADN polimerasa Phusion Hot Start II. Los investigadores pueden cargar directamente productos de PCR en un gel, lo que hace que sea una opción versátil para su uso en aplicaciones posteriores, como la secuenciación de ADN, la unión y la digestión de restricción.

Aspectos destacados

• Preparación de la reacción a temperatura ambiente
• Ninguna amplificación inespecífica ni degradación del cebador durante la preparación de la reacción
• Tiempo de reactivación cero gracias a una exclusiva tecnología de inicio en caliente
• Alta fidelidad (52 veces más que Taq)
• PCR rápida gracias a los breves tiempos de extensión (de 15 a 30 s/kb)
• Reacciones sólidas, mínima optimización necesaria
• Mayor producción con cantidades mínimas de enzimas
• Carga directa en geles

Aplicaciones

• PCR de alta fidelidad
• Alto rendimiento
• Amplificación de moldes complejos (gran cantidad de GC)
• Generación de moldes para secuenciación
• PCR multiplex
• PCR de largo alcance
• Clonación
• Mutagénesis
• Micromatriz

Uso de la ADN polimerasa Phusion
Las normas de recocido para las ADN polimerasas Phusion son diferentes de muchas de las ADN polimerasas comunes (como la ADN polimerasa Taq). Para obtener resultados óptimos, utilice nuestra calculadora Tm en www.thermofisher.com/tmcalculator.

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.

Especificaciones
ColorColorless
Fidelidad (frente a Taq)52 X
Inicio en calienteInicio en caliente integrado
N.º de reacciones500 reacciones
SobranteRomo
PolimerasaADN polimerasa Phusion Hot Start II
Tipo de productoADN polimerasa de inicio en caliente
Cantidad500 U (2 U/μl)
Formato de reacciónIndependiente
Condiciones de envíoDry Ice
Tamaño (producto final)20 kb o menos
Concentración2 U/μl
Para utilizar con (aplicación)Clonación, High-fidelity PCR
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Velocidad de reacciónFast
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Incluye:
• ADN polimerasa de alta fidelidad Phusion Hot Start II (2 U/μL)
• Tampón HF 5X Phusion
• Tampón GC 5X Phusion
• DMSO
• solución de 50 mM de MgCl2
Tanto los tampones HF como los GC Phusion proporcionan 1,5 mM de MgCl2 en la concentración final de 1X. Almacenar a -20 °C.

Preguntas frecuentes

What is enzyme concentration in Phusion Hot Start II High-Fidelity PCR Master Mix?

Phusion Hot Start II DNA polymerase concentration is optimized to give good results in most reactions. When the PCR reaction is set up according to the instructions, the final concentration of Phusion enzyme is 1 U in 50 µL reaction (0.4 U in 20 µL reaction).

Do Phusion DNA Polymerases add the non-template dependent 3'-A overhang?

Phusion DNA Polymerases generate blunt end products; therefore, blunt end cloning is recommended. If TA cloning is required, it can be performed by adding A overhangs to the blunt PCR product with e.g. Taq DNA Polymerase (Cat. No. EP0401). However, before adding the overhangs it is very important to remove all the Phusion DNA Polymerase by purifying the PCR product carefully, as the proofreading activity in Phusion DNA Polymerase is very strong. Any remaining Phusion DNA Polymerase will degrade the A overhangs, thus creating blunt ends again.

Can Phusion DNA Polymerases extend at 1 second/kb?

Yes it is possible, especially when amplifying smaller amplicons. Processivity of Phusion DNA Polymerases is 10 times that of Pfu. We recommend extension times of 15 s/kb for Phusion Flash PCR Master Mix. 15 s/kb is a conservative value that we can promise to work with almost any amplicon. In many cases, significantly shorter extension times (0-5 s/kb) can be used without compromising the yield. What separates Phusion Flash DNA Polymerase from other fast polymerases is that all steps in the PCR protocol can be shortened, including annealing and denaturation. This results in extremely fast protocols as compared with any other polymerase.

Can protocols optimized for Phusion DNA Polymerase be directly applied to Phusion Hot Start II DNA Polymerase?

Yes, protocols optimized for Phusion DNA Polymerase can be applied to Phusion Hot Start II DNA Polymerase reactions.

Do Phire and Phusion Hot Start II DNA Polymerases need a separate activation step in the PCR protocol?

No separate activation step is required since Phire and Phusion Hot Start II DNA Polymerases are inactivated by a reversibly bound, specific Affibody ligand that dissociates during initial denaturation.