Las vías de señalización de Jak/Stat desempeñan un papel esencial en las respuestas celulares a las distintas citocinas. Una de las vías de Jak/Stat, Jak2/Stat5, media la proliferación celular en respuesta a la interleucina-3 (IL-3), la prolactina, la eritropoyetina (EPO) y el factor estimulador de formación de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF). La desactivación del gen JAK2 causa letalidad embrionaria debido a una eritropoyesis defectuosa, lo que sugiere que la vía de Jak2/Stat5 representa un papel importante en la formación de glóbulos rojos. El reciente descubrimiento de la mutación activadora en JAK2 (V617F) presente en un alto porcentaje de pacientes con enfermedades mieloproliferativas (MPD) sugiere que la vía de Jak2/Stat5 puede ser una diana terapéutica potencial para ciertas formas de MPD. El factor de transcripción de Stat5 activado reconocen y se unen a una secuencia de ADN palindrómica específica que se encuentra en la región promotora de la β-caseína, del factor 1 regulador del interferón (irf-1) y de otros genes distintos. La línea celular CellSensor® irf1 - bla CTLL2 contiene un gen indicador de beta-lactamasa bajo control del elemento de respuesta de irf-1 integrado de forma estable en las células CTLL2. Las células CTLL2 son un clon de las células T citotóxicas que se derivan de ratones C57BL/6 y dependen del crecimiento celular de la interleucina 2 de ratón (mIL-2). Esta línea celular se ha validado para EC50 y el factor Z' en condiciones optimizadas con la mIL-2. Esta línea celular también se ha probado en condiciones de ensayo diversas, incluidos la concentración de DMSO, el número de células, el tiempo de estimulación y el tiempo de carga del sustrato. También se probó la capacidad de respuesta a los inhibidores de la vía. Las células CellSensor® irf1-bla CTLL2 se estimularon con la mIL-2 por triplicado sobre el rango de concentración indicado en un formato de 384 pocillos. Las células se incubaron durante 5 horas con agonista en DMSO al 0,5 % y, a continuación, se combinaron con el sustrato LiveBLAzer™-FRET B/G (CCF4-AM) durante 2,5 horas. Los valores de emisión de fluorescencia a 460 nm y 530 nm se obtuvieron por medio de un lector de placas de fluorescencia estándar. Las proporciones 460/530 para cada réplica se representaron en comparación con las concentraciones indicadas de mIL-2. Las células CellSensor® irf1-bla CTLL2 se trataron con el inhibidor 1 de Jak sobre el rango de concentración indicado en un formato de 384 pocillos durante 30 minutos. A continuación, las células se incubaron durante 5 horas con agonista de mIL-2 (1 ng/ml) en DMSO al 0,5 % y, posteriormente, se combinaron con el sustrato LiveBLAzer™-FRET B/G (CCF4-AM) durante 2 horas. Los valores de emisión de fluorescencia a 460 nm y 530 nm se obtuvieron por medio de un lector de placas de fluorescencia estándar, se convirtieron a inhibición de porcentaje en relación con un conjunto de controles (células no estimuladas y células estimuladas EC80) y se representaron en comparación con las concentraciones indicadas del inhibidor 1 de Jak. Si es cliente del sector académico y sin ánimo de lucro, consulte nuestros precios especiales.