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Citas y referencias (10)
Invitrogen™
Kit de expresión de Pichia EasySelect™
El kit de expresión EasySelect™ Pichia proporciona todos los componentes necesarios para la producción de proteínas en la levadura PichiaMás información
| Número de catálogo | Cantidad |
|---|---|
| K174001 | 1 Kit |
Número de catálogo K174001
Precio (MXN)
-
Cantidad:
1 Kit
El kit de expresión EasySelect™ Pichia proporciona todos los componentes necesarios para la producción de proteínas en la levadura Pichia pastoris. El kit EasySelect™ contiene cepas de levadura Pichia, vectores de expresión y reactivos que permiten la transformación de células de Pichia. La selección con el antibiótico Zeocin™ hace que sea fácil detectar variantes transformadas con un número alto de copias.
Ventajas del sistema de expresión de Pichia pastoris:
• Cultive células de Pichia con tanta facilidad como E. coli
• Obtenga una mayor densidad celular que con otros sistemas de expresión microbiana.
• Genere más proteína por célula que con otros sistemas de expresión microbiana.
• Benefíciese del procesamiento de proteínas eucariotas, el plegado de proteínas y las modificaciones postraslacionales.
• Ampliación sencilla de matraces de agitación a fermentación a escala industrial.
Un sistema probado de expresión de proteínas
Durante los últimos 30 años, Pichia pastoris se ha utilizado por laboratorios e industria de todo el mundo para producir cientos de proteínas diferentes de muchas especies, incluyendo la humana (ref. 1, 2, 3). La Pichia pastoris se puede cultivar tan fácilmente como las bacterias (E. coli) o la levadura (Saccharomyces cerevisiae) y, sin embargo, ofrece muchas ventajas sobre esos sistemas (ref. 4). La Pichia pastoris puede crecer a densidades celulares mucho más altas que las bacterias u otras levaduras. La Pichia pastoris es capaz de crecer con metanol como única fuente de carbono, lo que hace que su ampliación a niveles industriales sea relativamente barata.
El poder del promotor AOX1
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ utiliza el promotor del gen de oxidasa de alcohol 1 (AOX1) de Pichia para impulsar la producción de la proteína. La Pichia pastoris es capaz de crecer con metanol como su única fuente de carbono. Cuando se cultiva en metanol como única fuente de carbono, el ARNm de AOX1 representa hasta un 5 % del ARNm total y la enzima de AOX1 puede suponer hasta el 30 % del peso celular (ref. 5).
El sistema de expresión de Pichia EasySelect™ se suministra con los vectores pPICZ y pPICZα. Los vectores pPICZ y pPICZα contienen un sitio de clonación múltiple (MCS) y permiten la inserción de su gen de interés bajo el control del promotor AOX1. Los vectores pPICZ y pPICZα también contienen una etiqueta c-Myc para una fácil detección y una etiqueta de polihistidina (6xHis) para detectar y purificar proteínas de manera sencilla.
Puesto la Pichia pastoris secreta naturalmente pocas proteínas, puede utilizar la secuencia de señalización extracelular en los vectores pPICZα para forzar la secreción de su proteína en el medio de cultivo para simplificar la purificación de flujo descendente.
Obtenga una integración de número de copia alto con el antibiótico Zeocin™
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ utiliza el antibiótico Zeocin™ para seleccionar las células de Pichia transformadas. Los vectores pPICZ y pPICZα contienen el gen de la bleomicina de Streptoalloteichus hindustanus (Sh ble) que confiere resistencia al antibiótico Zeocin™. Los vectores pPICZ y pPICZα se pueden integrar de forma estable en el genoma de Pichia. Al aumentar la concentración del antibiótico Zeocin™, se pueden seleccionar fácilmente los clones con el mayor número de integrantes y los niveles de expresión de proteínas más altos.
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ contiene los siguientes componentes:
• Viales de punción de cepas de Pichia pastoris y E. coli para iniciar sus cultivos.
• Soluciones para la fabricación de células de Pichia competentes para la transformación.
• Vectores pPICZ y pPICZα para la fusión de su gen con el promotor AOX1.
• Cebadores de secuenciación para confirmar la inserción de su gen en los vectores pPICZ.
• Antibiótico Zeocin™ para la selección de células de Pichia transformadas.
Solo para uso en investigación. No indicado para uso en procedimientos diagnósticos.
Enlaces relacionados
• Consulte el prospecto del producto para los vectores pPICZ A, B, C (PDF).
• Consulte el prospecto del producto para los vectores pPICZα A, B, C (PDF).
• Consulte el prospecto del producto para el antibiótico Zeocin™ (PDF).
• Obtenga más información sobre el uso de la Pichia pastoris en Pichia Protocols, 1.ª edición disponible en Invitrogen.
• Obtenga más información sobre otros sistemas de expresión de Pichia de Invitrogen.
Referencias
1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug; 13 (4): 329-32. [PubMed]
3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1-10. [PubMed]
4. Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169-89. [PubMed]
5. Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. Marzo de 1989;9(3):1316-23. [PubMed]
Ventajas del sistema de expresión de Pichia pastoris:
• Cultive células de Pichia con tanta facilidad como E. coli
• Obtenga una mayor densidad celular que con otros sistemas de expresión microbiana.
• Genere más proteína por célula que con otros sistemas de expresión microbiana.
• Benefíciese del procesamiento de proteínas eucariotas, el plegado de proteínas y las modificaciones postraslacionales.
• Ampliación sencilla de matraces de agitación a fermentación a escala industrial.
Un sistema probado de expresión de proteínas
Durante los últimos 30 años, Pichia pastoris se ha utilizado por laboratorios e industria de todo el mundo para producir cientos de proteínas diferentes de muchas especies, incluyendo la humana (ref. 1, 2, 3). La Pichia pastoris se puede cultivar tan fácilmente como las bacterias (E. coli) o la levadura (Saccharomyces cerevisiae) y, sin embargo, ofrece muchas ventajas sobre esos sistemas (ref. 4). La Pichia pastoris puede crecer a densidades celulares mucho más altas que las bacterias u otras levaduras. La Pichia pastoris es capaz de crecer con metanol como única fuente de carbono, lo que hace que su ampliación a niveles industriales sea relativamente barata.
El poder del promotor AOX1
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ utiliza el promotor del gen de oxidasa de alcohol 1 (AOX1) de Pichia para impulsar la producción de la proteína. La Pichia pastoris es capaz de crecer con metanol como su única fuente de carbono. Cuando se cultiva en metanol como única fuente de carbono, el ARNm de AOX1 representa hasta un 5 % del ARNm total y la enzima de AOX1 puede suponer hasta el 30 % del peso celular (ref. 5).
El sistema de expresión de Pichia EasySelect™ se suministra con los vectores pPICZ y pPICZα. Los vectores pPICZ y pPICZα contienen un sitio de clonación múltiple (MCS) y permiten la inserción de su gen de interés bajo el control del promotor AOX1. Los vectores pPICZ y pPICZα también contienen una etiqueta c-Myc para una fácil detección y una etiqueta de polihistidina (6xHis) para detectar y purificar proteínas de manera sencilla.
Puesto la Pichia pastoris secreta naturalmente pocas proteínas, puede utilizar la secuencia de señalización extracelular en los vectores pPICZα para forzar la secreción de su proteína en el medio de cultivo para simplificar la purificación de flujo descendente.
Obtenga una integración de número de copia alto con el antibiótico Zeocin™
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ utiliza el antibiótico Zeocin™ para seleccionar las células de Pichia transformadas. Los vectores pPICZ y pPICZα contienen el gen de la bleomicina de Streptoalloteichus hindustanus (Sh ble) que confiere resistencia al antibiótico Zeocin™. Los vectores pPICZ y pPICZα se pueden integrar de forma estable en el genoma de Pichia. Al aumentar la concentración del antibiótico Zeocin™, se pueden seleccionar fácilmente los clones con el mayor número de integrantes y los niveles de expresión de proteínas más altos.
El kit de expresión de Pichia EasySelect™ contiene los siguientes componentes:
• Viales de punción de cepas de Pichia pastoris y E. coli para iniciar sus cultivos.
• Soluciones para la fabricación de células de Pichia competentes para la transformación.
• Vectores pPICZ y pPICZα para la fusión de su gen con el promotor AOX1.
• Cebadores de secuenciación para confirmar la inserción de su gen en los vectores pPICZ.
• Antibiótico Zeocin™ para la selección de células de Pichia transformadas.
Solo para uso en investigación. No indicado para uso en procedimientos diagnósticos.
Enlaces relacionados
• Consulte el prospecto del producto para los vectores pPICZ A, B, C (PDF).
• Consulte el prospecto del producto para los vectores pPICZα A, B, C (PDF).
• Consulte el prospecto del producto para el antibiótico Zeocin™ (PDF).
• Obtenga más información sobre el uso de la Pichia pastoris en Pichia Protocols, 1.ª edición disponible en Invitrogen.
• Obtenga más información sobre otros sistemas de expresión de Pichia de Invitrogen.
Referencias
1. Cereghino JL, Cregg JM. Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. 2002 Aug; 13 (4): 329-32. [PubMed]
3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1-10. [PubMed]
4. Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169-89. [PubMed]
5. Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. Marzo de 1989;9(3):1316-23. [PubMed]
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Resistencia bacteriana a los antibióticosZeocin™ (ZeoR)
Cepa bacteriana o de levaduraGS115, KM71H, X-33
Método de clonaciónEnzima de restricción⁄MCS
Mecanismo de expresiónExpresión basada en células
Sistema de expresiónLevadura
Para utilizar con (aplicación)Expresión de proteínas
Línea de productosEasySelect
Tipo de productoKit de expresión
Etiqueta de proteínaEtiqueta His (6X), etiqueta de epítopo c-Myc
Cantidad1 Kit
Agente de selección (eucariótico)Zeocin
Tipo de célulaCélulas de levadura
FormatoKit
PromotorAOX1
EspecieP. pastoris
VectorpPIC
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El kit de expresión de Pichia EasySelect incluye 20 μg de cada uno de los plásmidos de pPICZ A, B y C y pPICZα A, B y C, cepas (naturales) de Pichia pastoris X-33, GS115 (his4), KM71H (arg4 aox1::ARG4) y cepas de control para la expresión intracelular y secretada, 250 mg de antibiótico Zeocin™, medios (YP y YNB), kit de transformación de Pichia EasyComp™, 2 μg de los cebadores de secuenciación de 5´ AOX1, 3´ AOX1 y del factor-α. Los vectores pPICZ y pPICZα también están disponibles por separado. Se proporciona un control de expresión positiva de laCZ.
Almacene las cepas a +4 °C. Almacene los vectores y cebadores a -20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los componentes durante seis meses si se almacenan correctamente.
Almacene las cepas a +4 °C. Almacene los vectores y cebadores a -20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los componentes durante seis meses si se almacenan correctamente.
Preguntas frecuentes
When selecting for blasticidin-resistant transformants in the X-33 strain using pPIC6/pPIC6α vectors, why do I get large and small colonies on YPD plates containing 300 µg/ml blasticidin?
My transformation is not working. Do you have any suggestions?
My spheroplasting of Pichia worked twice, but hasn't worked since. The OD of the culture simply does not drop.
What are the different kinds of media used for culturing Pichia pastoris and S. cerevisiae?
Is there a recommended protocol for fermentation using constitutive expression vectors such as pGAPZ?
Citations & References (10)
Citations & References
Abstract
Fas ligand deficiency in HIV disease.
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:9159165
'Apoptosis is postulated to be involved as an anti-viral immune mechanism by killing infected cells before viral replication has occurred. The Fas-Fas ligand interaction is a powerful regulator of T cell apoptosis and could potentially act as a potent anti-viral immune mechanism against T cell tropic virus such as human
A composite Ets/Pit-1 binding site in the prolactin gene can mediate transcriptional responses to multiple signal transduction pathways.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:7673116
'Binding sites for the tissue-specific transcription factor, Pit-1, are required for basal and hormonally induced prolactin gene transcription. Although Pit-1 is phosphorylated in response to several signaling pathways, the mechanism by which Pit-1 contributes to hormonal induction of gene transcription has not been defined. Recent reports suggest that phosphorylation of
Expression and secretion of a biologically active glycoprotein hormone, ovine follicle stimulating hormone, by Pichia pastoris.
Journal:J Mol Endocrinol
PubMed ID:9845673
'The methylotrophic yeast, Pichia pastoris, has been used to co-express recombinant genes formed by fusion of the mating factor-alpha (MFalpha) leader and ovine follicle stimulating hormone (oFSH) alpha and beta subunit coding sequences. Pichia strains carrying single copies of the two fusion genes secreted recombinant oFSH (roFSH) to concentrations of
Improved tumour targeting by disulphide stabilized diabodies expressed in Pichia pastoris.
Journal:Protein Eng
PubMed ID:9488147
'Diabodies are dimeric antibody fragments held together by associated heavy and light chain variable domains present on different polypeptide chains. To improve their stability we have introduced cysteine residues into the V-domains to promote the disulphide crosslinking of the dimer. A crosslinked bivalent diabody against carcinoembryonic antigen (CEA) and a
High-level expression of recombinant Aplysia ADP-ribosyl cyclase in offhia pastoris by fermentation.
Journal:Protein Expr Purif
PubMed ID:9325145
'Cyclic ADP-ribose (cADPR), a Ca2+ mobilizing cyclic nucleotide derived from NAD+, is rapidly emerging as an endogenous modulator of Ca2(+)- induced Ca2+ release mechanisms in various cellular systems. ADP ribosyl cyclase, first isolated from the marine invertebrate Aplysia californica, cyclizes NAD+ to cADPR. In this study we have utilized the